细胞培养室的设计讲述.ppt

教学目标 了解动物细胞培养室的区域划分原则 熟悉动物细胞培养室各区域的主要功能 掌握动物细胞分离培养的工作要求 掌握动物细胞培养室的规章制度 本次课主要内容 动物细胞培养室的实验对象是离体的组织和细胞，对致病微生物及病毒无抵抗力，有被污染的危险，因此，细胞培养室不同于其他实验室之处就是要保持无菌。 般来说，无菌条件并不是要花很多钱去创造一个很大的无菌区域，重要的是动物细胞培养室能够防尘和不设立通道。使用超净工作台是创造无菌条件的简便方法，能为局部提供无菌条件，很大程度上方便了组织细胞培养工作，并使一些常规实验室有可能用于进行细胞培养。 动物细胞培养实验室应具备进行无菌操作、培养、准备、清洗、消毒灭菌和储存等六方面的功能。各个操作区域最好分别设置于相连的各个房间，特别是无菌操作室最好能单独设置；如果各部门都安置在一个大实验室内，无菌操作区与清洗、消毒灭菌区应分别位于两端，而准备、储存和培养区位于此两区之间。 动物细胞培养室的各种工作区域具有不同的特性和用途，在进行相应的操作时，要严格遵守各区域的操作要求和规章制度。本项目主要介绍动物细胞培养室的规划和布局设置、各操作区域的功能、基本设施、设置要求、操作要求和注意事项。 细胞培养室 第一节 动物细胞培养室的设计 一、动物细胞培养室的规划 动物细胞培养是一种无菌技术，要求工作环境和条件必须保证无微生物和不受其他有害因素的影响。为防止微生物污染和有害因素的影响，动物细胞培养室要求环境清洁，空气清新、干燥、无尘。动物细胞培养实验室由准备区、清洗区、消毒灭菌区、无菌操作区、培养区和储存区6部分组成，这些区域的共同特点是房间要宽敞、明亮，地面要便于清洁、防滑，墙壁的质地光滑坚硬，仪器设备布局合理，方便操作，避免交叉干扰，陈设简洁，便于清扫。 1、洁净度和粉尘 洁净度是指洁净空气中空气含尘(包括微生物)量多少的程度。 粉尘是指悬浮在空气中的固体微粒，习惯上称尘、灰尘、尘埃、烟尘、粉末等。国际标准化组织规定，粒径小于75μm的固体悬浮物定义为粉尘。 空气洁净度等级是洁净空间单位体积空气中，以大于或等于被考虑粒径的粒子最大浓度限值进行划分的等级标准，国家药品监督管理局发布的“中国标准”明确规定了洁净度的4个等级(表2．1)。洁净度等级应在空态、静态和动态方法进行测试，使用尘埃粒子测试仪来测定。 无菌无毒的操作环境和培养环境是保证细胞在体外培养成功的首要条件。细胞培养对无菌环境要求很高，在细胞操作时，一般需要在100级空气质量条件下进行。在体外培养的细胞由于缺乏对微生物和有毒物的防御能力，一旦被微生物或有毒物质污染，或者自身代谢物质积累，可导致细胞中毒死亡。 2、温度和湿度 体外培养的细胞和体内细胞一样，需要在恒定的温度下生存，一般最适宜生长温度为37℃，温度变化不应超过±0．5℃，这主要是由酶和蛋白质所需的最适温度决定的。温度过低时细胞生长缓慢甚至不生长，温度过高导致细胞死亡，温度升高2℃时，则不利于细胞生存，温度达到40℃以上细胞将很快死亡。 湿度是表示大气干燥程度的物理量。空气的干湿程度称为“湿度”。 在一定温度下，一定体积的空气中含有的水气越少，则空气越干燥；水气越多，则空气越潮湿。 在此意义下，常用绝对湿度、相对湿度、比较湿度、混合比、饱和差以及露点等物理量来表示；若表示在湿蒸气中水蒸汽的质量占蒸气总质量(体积)的百分比，则称之为蒸气的湿度。湿度不够或过高都不利于细胞生长。 二、动物细胞培养室的功能分区 动物细胞培养实验室应具备进行无菌操作、培养、准备、清洗、消毒灭菌和储存6个方面的功能。动物细胞培养实验室的6个区域最好都单独设置，分别置于相连的各个房间，特别是无菌操作室最好能单独设置；如果没有条件，可以将这些区域都安置在一个大实验室内，设计原则一般是无菌操作区与清洗、消毒灭菌区分别位于两端，无菌操作区设在室内较少走动的内侧，而准备、储存和培养区位于此两区之间，仪器设备安装排列合理，便于清洁。 1、无菌操作区 无菌操作区是只限于细胞培养及其他无菌操作的区域，最好能与外界隔离，不能穿行或受其他干扰。在一般环境的空气中，由于存在许多尘埃和杂菌，较易造成污染。因此，接种工作要在空气经过灭菌的环境里进行，小规模的无菌环境可利用超净工作台创造，大规模的需建无菌室。 无菌室主要用于实验材料的接种操作，所以也称接种室。 理想的无菌室应有内、外两间，内间是无菌操作间，外间是缓冲间。 房间容积不宜过大，以便于空气灭菌。 缓冲间用于准备工作，还有防止污染的作用，以保证操作间的无菌环境，同时可放置恒温培养箱以及必需的小型仪器。 无菌操作间则专用于无菌操作、细胞培养，其大小要适当，且其顶部不宜过高以保证紫外线的灭菌效果；内壁应当用塑钢板或瓷砖装修，墙壁光滑无死角以便清洗和消毒。 无菌操