病原学设计实验：小鼠感染产气荚膜梭菌及细胞免疫现象检查-1.ppt

小鼠感染产气荚膜梭菌及细胞免疫现象检查 实验原理 实验材料 实验流程 1 3 2 实验材料 2 实验材料 2 实验材料 2 实验原理 免疫荧光技术： 免疫学的基本反应是抗原-抗体反应。由于抗原抗体反应具有高度的特异性，所以当抗原抗体发生反应时，只要知道其中的一个因素，就可以查出另一个因素。免疫荧光技术就是将不影响抗原抗体活性的荧光色素标记在抗体（或抗原）上，与其相应的抗原（或抗体）结合后，在荧光显微镜下呈现一种特异性荧光反应。 实验材料 病原菌：产气荚膜梭菌悬液， 小白鼠：A、B两组 器材：注射器、解剖器材、荧光显微镜 材料：荧光色素 试验流程 结果分析 免疫荧光试验 取B组腹腔液 取A组腹腔液 48h B组腹腔注射菌液，A组腹腔注射等量生理盐水 吸取接种物 预实验 免疫荧光试验 目的：1、检验吞噬细胞的吞噬功能 2、检验T淋巴细胞的转化情况 步骤：1、检验吞噬细胞的吞噬功能 1）用荧光物质标记产气荚膜梭菌的抗体，并将 此抗体与细菌混合，从而标记产气荚膜梭菌。 2）将从A、B小鼠腹腔获得的吞噬细胞分别与已标记的产气荚膜梭菌混合培养一定时间 3）立即用荧光显微镜观察。观察标本的特异性荧光强度一般可用“+/-”表示 4）统计数据 2、检验T淋巴细胞的转化情况 1）用不同的荧光物质分别标记Thy- 1(CD90)抗体和CD45R/B220（相应mAb为RA3- 6B2）抗体 2）将从A、B小鼠腹腔获得的细胞分别与已标记的Thy- 1(CD90)抗体和CD45R/B220（相应mAb为RA3- 6B2）抗体混合培养一定时间 3）立即用荧光显微镜观察。观察标本的特异性荧光强度一般可用“+/-”表示 4）统计数据 活化T细胞表面标志 T细胞表面标志 结果分析 1、检验吞噬细胞吞噬功能 B组小鼠特异性荧光强度强于A组 B组小鼠吞噬细胞吞噬功能强于A组 结果分析 2、T淋巴细胞转化情况 B组小鼠特异性荧光强度强于A组 B组小鼠T淋巴细胞转化情况强于A组 问题分析 1.观察时发现荧光现象减弱 解决办法：经荧光染色的标本最好在当天观察 原因：一般标本在高压汞灯下照射超过3min就有荧光减弱现象经荧光染色的标本最好在当天观察随着时间的延长荧光强度会逐渐下降。 2.所取组织材料中的吞噬细胞数量少 解决办法：预实验——寻找含吞噬细胞较多的组织部分 THANKS