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薄层色谱 概 述 色谱法是利用不同物质在不同相态的选择性分配，以流动相对固定相中的混合物进行洗脱，混合物中不同的物质会以不同的速度沿固定相移动，最终达到分离的效果 。 薄层色谱（Thin Layer Chromatography） 薄层色谱又称薄层层析，是以涂布于支持板上的支持物作为固定相，以合适的溶剂为流动相，对混合样品进行分离、鉴定和定量的一种层析分离技术。 常用TLC表示。 属于固-液色谱的一种 基本原理 薄层色谱法是利用各成分对同一吸附剂吸附能力不同，使其在流动相（溶剂）流过固定相（吸附剂）的过程中，连续的产生吸附、解吸附、再吸附、再解吸附，从而达到各成分的互相分离的目的。 例如：用硅胶作吸附剂，其主要是根据吸附力与分配系数的不同，使混合物得以分离。 当溶剂沿着硅胶吸附剂移动时，带着样品中的各组分一起移动，同时发生连续吸附、解吸、反复分配作用。由于各组分在溶剂中的溶解度不同，以及吸附剂对它们的吸附能力的差异，最终将混合物分离成一系列斑点，从而达到分离的目的。 相关参数 影响Rf值的因素： （1）展开温度 ：室温对分离影响不明显。其他条件相同，温度低比温度高时展开慢，分离好。 （2）薄层厚度：板厚度变化对比移值影响明显；厚度达0.2mm时，影响较小；在0.25mm时，分离效果最佳。 （3）吸附剂含水量：与吸附剂的种类、使用时的加水量、风干时间、活化温度、活化时间等因素有关。 （4）层析缸中蒸气：缸中蒸气未达饱和时，比移值不能重现。为使缸中蒸气饱和，可以在缸内壁附上一层滤纸，让展开剂全部湿润；把展开剂放入层析缸一段时间后再放薄层板；尽可能在恒定温度下层析。 （5）其他影响因素：展开剂的pH、展开时间、展开距离、样品浓度、点样量、薄层板所用吸附剂中的粘合剂的种类和用量等，都有可能影响样品组分比移值的大小。 薄层色谱分类 常规制备薄层色谱（PTLC） 加压制备薄层色谱（OPLC） 离心薄层色谱(CTLC) 常规制备薄层色谱 1.固定相（吸附剂）的选择 在吸附薄层色谱中，固定相的选择十分重要。其选择应从两个方面考虑： a.被分离物质的性质（如极性、酸碱性、溶解度等） b.吸附剂吸附能力的强弱。 若被分离物质极性强，应选择吸附能力弱的吸附剂； 若被分离物质极性弱，应选择吸附能力强的吸附剂。 吸附剂就其性质而言，可分为有机吸附剂（如聚酰胺、纤维素和葡聚糖等）和无机吸附剂（如氧化铝、硅胶、硅藻土、磷酸钙、磷酸镁和硅酸钙镁等）。最常用的是氧化铝和硅胶，它们的吸附性能好，适用于多种化合物的分离。 常用的吸附剂厚度为0.5～2.5mm，色谱板的尺寸一般为20cm×20cm或20cm×40cm。薄层厚度与薄层板的尺寸限制了PTLC可以分离的样品量。 1.0mm厚的硅胶板最多可上样5mg／cm2。硅胶是最常用的吸附剂，可用它来分离亲脂或亲水性物质。 　　 PTLC板可以自己制备，也有预制板出售。自制PTLC板的优点在于吸附剂的厚度及组成可调节(最厚可达5mm)，也可以在吸附剂中掺入硝酸银及缓冲物质。 注意事项 2.流动相（ 展开剂）的选择 　　 展开剂选择是否适当是薄层分离的重要条件之一。在吸附薄层色谱中，选择展开剂主要是由被分离物质的极性、吸附剂的活性以及展开剂本身的极性来决定. 在薄层色谱中，一般先选择单一溶剂作展开剂，但对难分离组分，则需要使用二元、三元甚至多元的溶剂。先用一种极性较小的溶剂为基础溶剂展开混合物，若展开不好，用极性较大的溶剂与前一溶剂混合，调整极性，再次试验，直到选出合适的展开剂组合为止。 　　 对普通酸性组分：特别是离解度较大的弱酸性组分应在展开剂中加入一定比例的酸，可防止拖尾现象； 对于碱性物质：如某些生物碱，多数情况是选用氧化铝为吸附剂，选用中性溶剂为展开剂。若采用硅胶为吸附剂，则选用碱性展开剂为宜；但对某些碱性较弱的生物碱可使用中性展开剂。 理想的展开剂应能使混合物分离后各组分的Rf值相差尽可能大。 各组分理想的比移值在0.2-0.8之间。 化合物的极性、吸附剂的活性及展开剂的极性配合 a.分离非极性物质时，应选择非极性展开剂和高活性吸附剂； b.分离强极性物质时，则应选择强极性展开剂和活性较低的吸附剂； c.分离中等极性物质，则应选择中等极性物质和中等活性吸附剂。 操作步骤 点样注意事项 a.样品的浓度应在5％～10％左右。点样带应尽可能狭窄，以获得更好的分离效果。溶解样品的溶剂要尽量避免用水，因为水溶液斑点容易扩散，且不易挥发。 b.适当的点样量，可使斑点集中，点样量过大，易拖尾或扩散；点样量过少，不易检出。点样量多少，应视薄层的性能及显色剂的灵敏