艾滋病检测原理和技术规范课件讲义.ppt

HIV待确证样品 HIV阳性确证报告原件 感染者 确认报告原件 确认报告复印件备案 筛查实验室所在单位 筛查实验室所在单位 确证实验室 筛查实验室 艾滋病样本确证、报告流程： * * 认真填写各类表格（最好能打印），及时上报。 * * 艾滋病检测原理和技术规范 * * * * 一、艾滋病与艾滋病病毒 * * （有A～E多个亚型） 与一种感染灰身白脸猴的猴免疫缺陷病毒（SIV）相似。 HIV-1 HIV-2 Human immunodeficiency virus HIV （有A～J，O1～O4 多个亚型） 与一种感染黑猩猩的猴免疫缺陷病毒（SIV）相似。 * * 艾滋病病毒感染后，可严重破坏人体的免疫系统，使人体丧失抵御各种疾病的能力，有利于各种病原体的侵入，从而导致各种严重的、难以治愈的机会性感染或肿瘤，最终导致死亡，病死率可达100％。 * * HIV-1 M组 HIV-1 O组 HIV-2 非洲中部和东部 美国、欧洲、南美洲、非洲和亚洲 南美洲、印度、赞比亚、中国 非洲中部和东部 泰国、中非、印度 巴西、罗马尼亚、喀麦隆 加蓬、苏联、尼日利亚、乌干达、塞内加尔、赞比亚 喀麦隆、扎伊尔、中非 塞浦路斯 扎伊尔 喀麦隆、加蓬 HIV型别和亚型的 分类进化与地区分布： 西非、印度 HIV A B C D E F G H I J O1 O2 O3 O4 A B C D E * * 基因亚型与感染途径的关系 * * 感染分期 临床分期 维持时间 感染标志物 传染性 原发感染 潜伏期 潜伏期 2-4周 抗体阴性 (窗口期) 传染 危险性高 原发感染 症状期 急性 HIV感染 1-2周 传染 危险性高 慢性感染 潜伏期 无症状 HIV感染 2－15年 (平均 8-10 年) 抗体阳性 有传染性 临床 发病期 艾滋病 0－3年 (平均 1-2 年) 抗体阳性 抗原阳性 传染性强 艾滋病从感染到发病的一般过程 * * 二、艾滋病检测的原理及方法 * * 临床诊断 感染监测 耐药监测 治疗评价 干预评估 抗体检测 抗体检测 核酸定性 CD4检测 新感染检测 CD4检测 核酸定量 核酸定量 病毒分离 基因测序 核酸定性 核酸定量 各种检测技术为艾滋病防治工作 提供广泛的技术支持平台 * * 检验标志物 检验目的 检 验 方 法 HIV(1+2) 抗体 筛查试验 金标法、硒标法 快速诊断试验 明胶颗粒凝集试验(PA) 微孔板法 酶联免疫试验 （ELISA） 第三代：双抗原夹心法 第四代：增加检测P24抗原 确证试验 蛋白印迹法(WB) 手工/仪器 病毒抗原 早期诊断 酶联免疫试验 检测P24抗原 病毒核酸 临床诊断 治疗评价 定性试验 检测DNA 定量试验 即病毒载量，检测RNA CD4 流式细胞仪法 检测CD4+T淋巴细胞 艾滋病实验诊断方法 * * 诊断试剂 窗口期 特 点 金标法、硒标法 5周 35天 敏感性低，容易漏检 明胶颗粒凝集试验(PA) 5周 35天 特异性较好，敏感性不足 ELISA（国产第三代） 3周多 20～25天 普及，稳定性欠佳 ELISA（进口第三代） 3周 18～22天 较为成熟，稳定性好 ELISA（进口第四代） 2周多 16～17天 假阳性率偏高 核酸检测 1周多 10～12天 不用于常规诊断 各种诊断试剂特性 * * 硒标法 金标法 HIV抗体筛查试验 * * 明胶颗粒凝集试验 （Particle agglutination test，PA） * * PA的操作和结果判断 * * 5 450/630nm下测定OD值 混匀，加盖，37℃温育 洗板 3 加入底物 第二次特异性结合 4 加入终止液 1 加入样品 洗板 2 加入酶标记物 加盖，37℃温育 加盖，37℃温育 第一次特异性结合 酶联免疫分析 ELISA（双抗原夹心、两步法） * * 快速法可否单独使用？ 《全国艾滋病检测技术规范》（2004版）：将PA、dot-EIA、胶体硒法纳入快速检测规范方法，因此可以使用。 有研究指出： 任何一种快速试剂可以筛查出99%以上的阴性样本； 两种快速试剂均为阳性时，可以筛查出98%以上的阳性样本； 两种快速试剂结果不一致时，可用ELISA复检； 单独使用或两种同时使用时，特异性差别无显著意义。 * * ■ 针对各种病毒蛋白的特异抗体 ■ 区分ELISA真阳性与假阳性 ■ 检测HIV-1和HIV-2 HIV抗体确证试验 Western Blot 免疫印迹法 * * 基因名称 代号 功 能 基因产物片段 HIV-1 HIV-2 结构基因 外膜蛋白基因 env 合成外膜蛋白 gp160 gp120 gp41 gp140 gp105