微生物学实验讲稿..doc

微生物实验实验一 显微镜的使用及微生物形态观察一. 目的1. 了解普通光学显微镜的构造,学习显微镜的使用方法和保养.(高,低倍镜的使用)2. 观察细菌,霉菌,酵母菌个体形态,学会生物图的绘制.油镜的放大倍数最大(100),故镜头焦距短,直径小,但所需光照强度却最大.从标本片透过的光线是从玻片进入空 气,再进入镜头.由于玻璃和空气的介质密度不同,有些光会因折射或反射而 不能进入镜头.物象就显现不清.为了不使通过的光线有所损失,之间加入折射率和玻璃(n=1.52)相仿的香柏油(n=1.515).λ/ 2N.A.= λ/ 2 n·s i n α/ 2，可以增加视野的明亮度，提高折射率，增大分辨率。其中数值孔径: N.A. = n·s i n α/ 2 n — 玻片和物镜之间的折射率.α— 光线最大射入角.分辨率(最大可分辨距离)=λ/ N.A. λ—波长 . 实验器材1. 光学显微镜2. 示范片:曲霉,青霉,酵母菌,. 实验内容 (一) 显微镜的构造和使用方法1. 构造机械部分: 镜筒(双筒,两筒间距离可调,上装有目镜)转换器(3孔,装有物镜)载物台(中央圆孔,弹簧夹,移动器)调节器(粗调,细调)镜臂(支撑作用)镜座(上有光源,亮度可调)光学部分:目镜(10×,16×)物镜(低倍镜10×,高倍镜40×,油镜100×)聚光器(内有光圈调节)光源(光量可调)显微镜放大倍数 = 目镜放大倍数 × 物镜放大倍数物镜上的标识: 1 .25 (0.65,0.25) 100(40,10) 160 0.17 数值孔径 放大倍数 镜筒长 盖玻片厚度2. 显微镜的使用低倍镜的使用 (1)双手取出显微镜置于实验台上,接上电源,打开开关,调节合适光量. (2)转动转换器,将低倍镜移至正下方.调节两目镜镜筒间的距离. (3)将载玻片放在载物台上夹住,移动观察对象于圆孔正中. (4)侧视物镜,转动粗调将载物台上移,至载玻片距物镜头约5mm时停止. (5)双眼向目镜里观察,同时旋转粗调节器使载物台缓慢下移,若标本显出但不清晰,可用细调节器调至清晰.若粗调旋转太快,超过焦点没有看到标本,则必须重复(4), (5)步骤.不能在眼睛观察目镜的同时旋转粗调,以防物镜与载玻片相碰撞,造成损坏. 1-5 高倍镜的使用在用低倍镜找到观察目标后,若需要进一步放大观察,将其移到视野中央.用转换器将高倍镜移到镜筒下方,将光量调大一点.若标本不清晰,用细调上下转动使之清晰.(此时不再动粗调) 3.显微镜的维护 (1)将载物台降至最低,取下标本片. (2)将光量调至最小,关上电源. (3)用镜头纸先檫目镜,物镜,再擦显微镜其它部分. (4)将显微镜放入镜箱,还原.微生物形态的观察1. 用低倍镜和高倍镜观察,曲霉,青霉,酵母菌,放线菌,示范片.. 实验报告 1画出微生物形态图,并标明显微镜的放大倍数.10 ╳ 10 实验 微生物的染色一. 目的1. 学习微生物的染色技术,掌握微生物的单染色法和革兰氏染色法. 2. 复习油镜的操作.二.原理—OH,-COOH等酸性基团和-NH2,-NHCH3等碱性基团形成的助色基团，它们的存在使染料物质离子化，极性增强，促进染料与组织间发生作用，产生染色效果。我们把助色基团中具有酸性或碱性基团的染料分别称为酸性或碱性染料。作为染料，必须有发色基团和助色基团相互配合，缺一不可。如伊红有一个-COOH助色基团，在水中电离时放出氢离子，本身带负电荷，配制成伊红染料时，与强碱NaOH作用生成-COONa，此时的Na离子反而在溶液中呈碱性，所以不能认为酸性染料在溶液中就是酸性。所以酸性或者碱性染料的界定并非由染料溶液PH值决定的，而是根据染料物质中助色基团电离后的电荷来决定，一般来说，助色基团带正电荷的染料为碱性染料，助色基团带负电荷的染料为酸性染料。碱性染料PH一定大于7，酸性染料也不一定小于7. 碱性染料有美兰、甲基紫、草酸铵结晶紫、醋酸洋红、碱性复红、中性红、孔雀绿和蕃红等，在一般的情况下，细菌易被碱性染料染色。伊红、刚果红、藻红、苯胺黑、苦味酸和酸性复红等，可与碱性物质结合成盐。当培养基因糖类分解产酸使pH值下降时，细菌所带的正电荷增加，这时选择酸性染料，易被染色。.单染色法:微生物不但个体微小,且无色半透明.要在显微镜下观察清楚,必须染上颜色 .微生物细胞中含有大量的蛋白质等一类两性电解质:在酸性溶液中结合质子带正电;在碱性溶液中给出质子而带负电.等电点一般在pH=2~5.所以,在中性,碱性或弱酸性溶液中,微生物细胞通常带负电荷.碱性染料在电离时,染色部分是带正电荷的,容易与带负电荷的菌体结合使之着色.经染色后的菌体细胞与背景形成鲜明的对比,在显微镜下很容易观察..革兰氏染色法:革兰氏染色法将细菌分为G+