微生物实验作业指导书..doc

微生物基本操作作业指导书 文件编号： 文件类别： 品质系统作业指导书 撰写单位： 品控部 版 本：第１版 发行日期： 机密等级： 机密 一般 合计页数：共3页 核 准 审 核 制 定 名称 微生物基本操作制作业指导书 文件编号： 目的： 规范微生物基本操作。 范围： 适用于微生物检测。 名词解释： 无 职责： 微生物基本操作由检验组负责。 作业内容： 5．1 器皿的清洗：凡被污染的器皿，应先经过121℃，30min高压蒸汽灭菌后再进行清洗。 5．2 玻璃容器的包扎：灭菌前器皿应包扎紧密完整后才进行灭菌，以防止灭菌后器皿受到污染。 5．2．1 平皿、吸管应用金属筒包装，或以牛皮纸包扎； 5．2．2 试管应冠以金属帽； 5．2．3 三角瓶及其它玻璃容器应在瓶口以牛皮纸内衬硫酸纸包扎。 5．3 培养基及器皿的灭菌： 5．3．1 器皿的灭菌：干燥加热空气灭菌法（在干燥箱中利用热空气灭菌）。适用于玻璃器皿、 金属及其它干燥耐热物品，通常在160℃，2hr（温度不超过180℃，以 免将棉塞或包装纸张烤焦着火）。另外，灭菌物品不宜摆放太紧密，应 留有空隙；且不要直接接触干燥箱底和箱壁。在降温时要缓慢进行，以 免玻璃破裂。 高压蒸汽灭菌：适用于金属器具、玻璃器皿、基础培养基及其它耐热物品。 A 含糖类不耐热培养基：115℃（0.0727MPa），15~20min。培养基的配制数量应以适 量为宜，避免剩余部分多次灭菌后，使用时其性质已受到影响． 　　　B 染菌培养物：121℃(0.1034MPa),30min; C 器械灭菌：121℃，30min； D 灭菌锅的使用： a 使用前请参照说明书加水至刻度，重复使用时应将水量补足，水边浑浊需更换； b 接通电源，打开排气阀排气，水沸腾后排气10~15min； c 排气后，关闭排气阀，使蒸汽压上升到规定要求并维持规定时间（按灭菌物品性 质，参照5.3.2ABC）； d 达到规定时间后，对需干燥的物品，立即打开排气阀排出蒸汽，待压力恢复到零时，自然冷却至60℃后开盖取物。如为液体物品不要打开排气阀，而应立即切断电源，待自然冷却，压力恢复至0℃以下再开盖取物，以防止突然减压液体剧烈沸腾或容器爆裂。 e 灭菌锅的温度、压力应定期测试。测试方法：去灭菌指示带置于灭菌锅的上、中、底部（灭菌物品间隙），在按照规定要求灭菌后，观察指示带的颜色变化是否达到标准，以判别灭菌锅之灭菌效果。 生效日期 页次 1/2 版序 A 名称 微生物基本操作制作业指导书 文件编号： 灭菌后处理：灭菌后物品，注意放置场所，以免再度污染。 A 高压蒸汽灭菌后的物品除培养基及稀释液外的其他物品，如玻璃平皿金属器具或棉花等均应先置于105℃烘箱内，根据包装大小应保持1h以上，至干燥后使用。 B 包装损坏或塞子脱落者，不可作为无菌品使用。 C 如包装有明显浸水者,不可作为无菌品使用。 D 合格的灭菌物品应存放于贮藏室或防尘柜内,严禁与未灭菌物品混放,玻璃器皿应坚持随用随灭的原则,灭菌后若保存最长不得超过24h。 E 灭菌合格的培养基不应贮存过久，一般不得超过24h，必要时可置于4℃冰箱存放。 5．4 无菌间的使用： 5．4．1 缓冲间的使用：实验室中需穿着之实验衣帽、鞋等物品需放置在缓冲间。并于实验前后打开紫外灯，照射时间不少于30min； 5．4．2 超净台的使用： A 使用前应先用75%酒精棉擦拭台面，再打开超净配备的紫外灯，照射时间不少于30min； B 使用时,应关闭紫外灯,打开日光灯,同时打开无菌风直至实验结束； C 超净台灭菌效果应以落菌实验加以验证； 555555 　5．4．3 无菌间使用前后应将门关紧，打开紫外灯，悬吊式紫外灯消毒，应选用30W,距离在 1．0m处，照射时间不少于30min。 5．4．4 紫外灯管应常清洁，以防上面的灰尘污垢影响紫外线的穿透。紫外灯管应定期更换。 5．5 无菌操作要求： 5．