微生物实验复习资料..docx

实验一 培养基的配制实验原理：培养基是按照微生物生长繁殖所需要的各种营养物质，用人工方法配制而成的营养基质。其中含有碳源、氮源、无机盐、生长因子以及水分等。微生物在培养基上生长繁殖还必须在最适酸碱度范围内才能表现它们最大生命力，因此不同种类的微生物应将培养基调到一定pH值范围。培养基种类很多，不同的微生物所需培养基不同。按其组成可分合成培养基和天然培养基。按其物理状态可分固体培养基，液体培养基和半固体培养基。按其特殊用途可分加富培养基，选择培养基、鉴别培养基。实验材料：培养皿：12套（ф9cm）；吸管：3支（1ml）； 三角玻扒：2支； 烧杯：1套（50ml，100ml，250ml，500ml）； 量筒：1个（100ml）；容量瓶：1个（1L）； 玻棒：1支；药匙：2把；剪刀：1把；铁丝：数支；标签贴纸：1张；铅笔：1支。操作流程：培养基配方：表1-1 NMS ( Higgens nitrate minimal salt )培养基药品名称每升培养基中的含量NaNO30.85 g KH2PO40.53 g Na2HPO40.17 g K2SO4·7H2O 0.037 g CaCl2·2H2O 0.007 g 微量元素贮存液2 mL 1mmol/L H2SO40.5 mL FeSO4·7H2O 11.2 mg CuSO4·5H2O 2.5 mg 琼脂 ( 固体培养基 ) 15 g pH值7.0 表1-2 微量元素贮存液的配方药品名称每升培养基中的含量ZnSO4·7H2O0.2042 gMnSO4·4H2O0.223 gH3BO30.062 gNa2MoO4·2H2O0.048 gCoCl2·6H2O0.048 gKI0.083 g表1-3 LB培养基的配方药品名称每升培养基中的含量酵母粉5 g胰蛋白胨10 g氯化钠g注意事项：1同学们要将配好的溶液贴好标签。注明培养基名称，组别，日期。2在烧杯融化琼脂的过程中，人要在电炉旁看着，以免培养基因沸腾而溢出烧杯。同时，需不断搅拌，以防琼脂糊底烧焦。注意带上棉纱手套防止烫伤。 3分装过程中，注意不要使培养基沾在管口上，以免沾污棉塞而引起污染。实验二 湿热灭菌 实验原理： 培养基分装好后，塞上棉塞，外面再包一牛皮纸，便可灭菌。灭菌的时间和温度按各培养基规定进行，以保证灭菌效果和不损坏培养基的必要成分。 在实验室里用得最多的加热灭菌法是高压蒸汽灭菌和干热灭菌。一般培养基和灭菌水等用高压蒸汽灭菌，而玻璃器皿常用干热灭菌。蒸汽灭菌为105-121℃，15-20分钟，干热灭菌为160-170℃，1-2小时。目的都是使细菌体内蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。 ???? 在同一温度下，湿热杀菌效力比干热大，因为在湿热情况下，菌体吸收水分，使蛋白质易于凝固，同时湿热穿透力强，而且当蒸汽与被灭菌物体接触凝成水分时，又可放出热量，使温度迅速增高，从而增加灭菌效力。操作过程：实验材料准备根据实验目的，准备好实验材料。灭菌前一定要把物品清点几次，否则还要再灭菌一次，耽误时间耽误事。（二）包扎1．培养皿：以旧报纸密密包紧，一般以6套做一包，待灭菌。2．吸管：在距其粗头顶端约0.5cm处，塞一小段1.5cm长的棉花。棉花要塞得松紧恰当（过紧，吹吸液体太费劲；过松，吹气时棉花会下滑），然后分别将每支吸管尖端斜放在旧报纸条的的近左端，与报纸约呈60o角，并将右端多余的报纸打一小结。3．三角玻扒：跟包扎吸管相似，将三角部分斜放在报纸条的近左端，与报纸约呈45o角，并将右端多余的报纸打一小结。（三）灭菌1、先检查灭菌锅的水位是否够。不够要加水，否则干烧会损坏设备。2、把灭菌东西的放到锅里，把排气阀打开，待冷空气排完，将排气阀关上，待压力升到1.0mPa，温度到121℃，放气维持。3、这个温度压力下灭菌20分钟，然后停止加热，慢慢放气，压力为零时，打开锅盖，把灭菌好的物品拿到无菌操作台上。（无菌操作台要提前紫外灭菌）实验三 平板的制备及菌种的分离纯化材料的准备无菌培养皿：两包，12套无菌三角玻扒：1支5ml、1ml和 100ul的移液枪头若干接种器具：酒精灯，镊子，消毒棉球，打火机，标签贴纸，圆珠笔， 一次性口罩，纸巾，封口膜。NMS固体培养基，无菌水，试管10只，试管架（二）倒平板将灭菌融化的琼脂培养基,冷却至50℃左右(以手背能忍受的温度为准)温度过高时，皿盖上的冷凝水太多；温度低于45℃时，培养基易于凝固而无法制作平板。 平板的制作应在酒精灯火焰旁进行，右手掌心握住三角瓶的底部，左手打开三角瓶棉塞，以右手的无名指和末指夹持瓶塞，灼烧瓶口。左手拿培养皿，用左手的大拇子将皿盖掀开一缝，至瓶口刚好伸入，向皿内注入培养基（约15 mL,厚度约0.5 cm左右），迅速盖好皿盖。