微生物实验指导..doc

微生物学实验指导 微生物学课程组 编 朝阳师专生化系 二00九年三月 编写说明 微生物学是现代生物学科的先头学科,是科学技术现代化和农业现代化的重要学科领域之一，就其学科性质而言它又是一门实践性很强的学科。 实验课的教学目的是训练学生掌握微生物学最基本的实验操作技能，了解微生物学的基本知识，加深理解课堂讲授的微生物学理论知识，同时，通过实验培养学生观察、思考、分析问题和解决问题的能力；实事求是，严肃认真的科学态度；为以后课程的学习和将来的工作以及科学研究打下坚实的基础。 本实验指定是在参考有关院校的微生物学实验教材的基础上，结合我们的实验室条件以及仪器设备状况，经过多方取舍编写而成，可供生物技术及畜牧兽医等专业师生参考。 由于编者水平有限，加上时间仓促、经验不足，在许多方面肯定有不少缺点与错误，希望各位读者批评指正。 在编写过程中，生化系全体师生给予大力支持，在此表示感谢。 编者 2009.03  目 录 实验一 显微镜的使用 实验二 细菌的简单染色法 实验三 革兰氏染色法 实验四 细菌的芽孢染色法 实验五 放线菌的形态观察 实验六 霉菌的形态观察 实验七 酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴别 实验八 微生物大小的测定 实验九 显微镜直接计数法 实验十 培养基的配制和灭菌 实验十一 微生物的分离与纯化 实验十二 附录 实验一 显微镜的使用 一、目的要求 1、熟悉普通光学显微镜的构造及其使用方法。 2、了解油镜的原理，并掌握其使用方法。 二、实验原理 （一）、普通光学显微镜的构造 普通光学显微镜包括机械部分和光学部分两部分。机械部分包括镜座、镜臂、镜筒、载物台、物镜转换器、粗调节螺旋、细调节螺旋、标本夹等。光学部分包括接目镜、接物镜、反光镜、光圈（虹采）、聚光镜（集光器）等（图1-1）。 （二）、油浸系的原理 浸系是在油浸镜与标本之间加1滴香柏油，调整光源检查细菌标本的方法。油浸镜是一种高倍放大的物镜，一般都刻有放大倍数，如95x、100x等。其镜头标记国产镜多用“油”字表示，国外产品则用“Oil”（Oil Immersion）或HI（homogeneous Immersion）表示。而且油镜的镜身较高倍镜和低倍镜为长，镜片最小，这也是识别的另一种标志。其使用原理是：由于香柏油与玻璃的折光率相似（香柏油为1.515，玻璃为1.52）。镜检时，滴加香柏油的作用是使光源尽可能多的进入物镜中，避免光线通过折光率低的空气（折光率为1.0）而散失，因而能提高物镜的分辨率，使物像明亮清晰（见图1-2）。 三、实验器材 1、菌种 金黄色葡萄球菌及大肠杆菌。 2、香柏油、二甲苯、擦镜纸。 四、方法步骤 （一）显微镜油镜的使用 1、用低倍镜对光。 2、低倍镜观察（寻找观察目标）。 3、高倍镜观察（选取理想的观察目标）。 4、油镜观察：高倍镜观察后----上升镜微--油镜转至正下方在载玻片上加一小滴香柏油--小心地下降镜微使镜头浸在油里----用粗螺旋将镜微缓慢上升，寻找目标（物象）----用螺旋调节，使物象清晰----观察记录。 5、观察完毕。上升镜筒转动物镜转换器，使油镜物镜偏位。用干净擦镜纸擦去镜头上的油迹，最后再用擦镜纸擦去残留在镜头上的二甲苯。 6、将显微镜各部分还原，放回箱中。 （二）细菌三态的观察 按照上述步骤用油镜观察标本后绘图。 五、结果与思考 1、绘图记录观察 结果。 2、思考题 用油镜观察时应注意哪些问题？在载玻片和镜头之间加滴什么油？起什么作用？  实验二 细菌的简单染色法 一、目的要求 1、学习微生物涂片、染色的基本技术，掌握细菌的简单染色法。 2、初步认识细菌的形态特征。 3、巩固油镜的使用方法和无菌操作技术。 二、实验原理 细菌的涂片和染色是微生物学实验中的一项基本技术。细菌的细胞小而透明，在普通的光学显微镜下不易识别，必须对它们进行染色。利用单一染料对细菌进行染色，使经染色后的菌体与背景形成明显的色差，从而能更清楚地观察到其形态和结构。此法操作简便，适用于菌体一般形状和细菌排列的观察。常用碱性染料进行简单染色，这是因为在中性、碱性或弱酸性溶液中，细菌细胞通常带负电荷，而碱性染料在电离时，其分子的染色部分带正电荷，因此碱性染料的染色部分很容易与细菌结合使细菌着色。经染色后的细菌细胞与背景形成鲜明的对比，在显微镜下更易于识别。常用作简单染色的染料有美蓝、结晶紫、碱性复红等。当细菌分解糖类产酸使培养基pH下降时，细菌所带正电荷增加，此时可用伊红、酸性复红或刚果红等酸性染料染色。染色前必须固定细菌。其目的有二：一是杀