微生物实验教学..doc

微生物实验教学 ?来源：/huaxue/kejian/weishengwuxue/syjx.htm 实验一 培养基的制备一、实验教学目标基本与要求1、明确培养基的配制原理。 2、掌握配制培养基的一般方法和步骤。 二、实验内容1、介绍培养基的配制原理和方法步骤 2、动手称量试剂、配制牛肉蛋白胨培养基三、培养基的制备过程称量--配置--调节pH值--过滤--分装--灭菌1.称量按照培养基配方，准确称量各成份放于烧杯中。对于不是粉状（如肉膏），应用烧杯称量。2.配调向上述烧杯中加入所需要的水量（可视情况不同，一次或多次加入水），搅拌，使其溶解（可加热助溶）。如是配制固体培养基，在琼脂的熔化过程中，需不断搅拌，并控制火力不要使培养基溢出或烧焦。待完全熔化后，补足所失水分。如果配方中含有淀粉，则需先将淀粉用少量冷水调成糊状并在火上加热搅拌，然后加足水分及其他药品，待完全熔化后补足所失水分。3.调节pH值一般做法是：培养基溶解均匀并冷却至室温时用pH试纸测pH，然后根据要求加酸或碱（一般用1molHcl和1molNaOH），要缓慢少量且多加搅拌。培养基配方为自然pH时，不用调节。 4.过滤用滤纸或多层纱布过滤，一般无特殊要求可省去。5.分装将制好的培养基分装入试管内或三角瓶内，管（瓶）口塞上棉塞。固体培养基要趁热装。 分装时要避免培养基粘染管（瓶）口，引起污染。分装量可分为下面几方面：（1）斜面：装量为管长的1/4-1/5。（2）液体培养基、高层培养基、半固体培养基：装载量不超过管长的1/3。（3）三角瓶：装量不超过容积1/2。6.灭菌塞棉塞，包扎，灭菌。高压蒸汽灭菌法：是在密闭的加压容器内进行，加热使器内的水产生蒸汽，由于密闭，增加了器内的压力，使水的沸点升高，从而获得高于100度的蒸汽温度。四、实验报告记录本实验配制培养基的名称、数量，并图解说明其配制过程，指明要点。五、问题和思考l．配制培养基有哪几个步骤?在操作过程中应注意些什么问题?为什么?2．培养基配制完成后，为什么必须立即灭菌?若不能及时灭菌应如何处理?已灭菌的培养基如何进行无菌检查?3．试设计实验对饮料进行无菌检查。 实验二 消毒与灭菌 一、实验教学目标与基本要求 了解消毒和灭菌的原理，掌握各种灭菌方法的操作步骤。 二、器材和试剂培养皿、试管、吸管、电烘箱、牛肉膏蛋白胨培养基，培养皿(6套一包)，手提式高压蒸气灭菌锅、培养基牛肉膏蛋白胨平板、紫外线灯等。溶液或试剂3%~5%石炭酸或2%~3%来苏尔溶液等。三、实验内容：1．干热灭菌法2． 高压蒸汽灭菌3．紫外线灭菌法四、实验步骤（一）干热灭菌法1、基本原理干热灭菌是利用高温使微生物细胞内的蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。细胞内的蛋白质凝固性与其本身的含水量有关，在菌体受热时，当环境和细胞内含水量越大，则蛋白蛋凝固就越快，反之含水量越少，凝固缓慢。因此，与湿热灭菌相比，干热灭菌所需温度要高（160～170℃），时间要长（1～2h），但干热灭菌温度不能超过180℃，否则，包器皿的纸或棉塞就会烧焦，甚至引起燃烧。2、操作步骤（1）装入待灭菌物品将包好的待灭菌物品（培养皿、试管，吸管等）放入电烘箱内，关好箱门。物品不要摆得太挤，以免妨碍空气流通，灭菌物品不要接触电烘箱内壁的铁板，以防包装纸烤焦起火。（2）升温接通电源，拨动开关，打开电烘箱排气孔，旋动恒温调节器至绿灯亮，让温度逐渐上升。当温度升至100℃时，关闭排气孔。在升温过程中，如果红灯熄灭，绿灯亮，表示箱内停止加温，此时如果还未达到所需的160—170℃温度，则需转动调节器使红灯再亮，如此反复调节，直至达到所需温度。（3）恒温当温度升达到160～170℃时，恒温调节器会自动控制调节温度，保持此温度2h。干热火菌过程。严防恒温调节的自动控制失灵而造成安全事故。（4）降温切断电源、自然降温。（5）开箱取物待电烘箱内温度降到70℃以下后，打开箱门，取出灭菌物品。电烘箱内温度末降到70℃，切勿自行打开箱门以免骤然降温导致玻璃器皿炸裂。3、思考题：（l）在干热灭菌操作过程中应注意哪些问题，为什么?（2）为什么干热火菌比湿热灭菌所需要的温度要高，时间要长?请设计干热灭菌和湿热灭菌效果比较实验方案。 （二）、高压蒸气灭菌1、基本原理高压蒸气灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸气。待水蒸气急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽，然后关闭排气阀，继续加热，此时由于蒸气不能溢出，而增加了灭菌锅内的压力，从而使沸点增高，得到高于100℃的温度。导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。在同一温度下，湿热的杀菌效力比干热大。其原因有三：一是湿