微生物实验讲义..doc

微生物学实验讲义 绪论 实验课的目的与要求 1、普通微生物学实验的目的 掌握微生物的基本操作技能，了解微生物学的基本知识；加深对课堂理论的理解。同时培养同学认真观察思索、分析解决问题的能力和严肃认真的科学态度。 2、普通微生物学实验课的要求 a、实验预习 了解实验的目的和原理，做到每一步实验都心中有数。 b、实验观察和记录 微生物实验的连续性较强，实验中也较常出现突发情况，所以要求同学认真细致观察，如实记录。 c、实验结果 要求同学实事求是地填写实验结果，交给老师评阅。 d、爱护公共财物并维护公共秩序： 公用的仪器药品用后放回原处。 对精密仪器（显微镜、天平）细心维护，轻拿轻放。 从冰箱或温箱取放物品时要随时关门。 对消耗性的材料、用品、药品要厉行节约（擦镜纸、滤纸条等）。 3、实验室规则 微生物实验不同于动、植物实验，我们会经常接触到一些致病菌或条件致病菌，所以希望大家严格遵守无菌操作，为保证自身及他人的健康，以防污染或感染。 a、实验室的整洁 非必需书、物品请勿带入实验室，不得在室内吸烟、进食，实验后收拾、擦净桌子。 b、实验时的需小心 如遇到盛菌试管打破或皮肤破伤要及时处理。 c、实验培养的材料 标明自己的组别、处理方式，放入教师指定地点培养。 d、实验后的灭菌 所用物品可进行3%来苏水浸泡消毒或高压灭菌。 e、实验前后 工作之前先洗手，工作后用肥皂洗手。 f、离开实验室 一定关闭、水、电、门、窗。 第一部分 微生物的染色与形态结构的观察 基本原理：虽然可以用相差显微镜等直接观察微生物的形态特征，但其应用有局限性；用电子显微镜可以观察到微生物的各种形态结构，但因其价格昂贵、设备条件要求高、操作也较复杂，应用上也受一定限制。所以，一般实验室仍常用普通光学显微镜来进行微生物形态学特征的观察。然而，微生物（尤其是细菌）细胞小而透明，当把细菌悬浮于水滴内，用光学显微镜观察时，由于菌体和背景没有显著的明暗差，因而难以看清它们的形态，更不易识别其结构，所以，用普通光学显微镜观察细菌时，往往要先将细菌进行染色，借助于颜色的反衬作用，可以更清楚地观察到细菌的形状及其某些细胞结构。因此，为了研究微生物的形态特征和鉴别不同类群的微生物，微生物的染色及形态结构的观察是微生物学实验中十分重要的基本技术。 用于微生物染色的染料，是一类苯环上带有发色基团和助色基因的有机化合物。发色基团赋予化合物的颜色特征，助色基团则赋予化合物能成盐的性质，仅含发色基团的苯化合物（称色原）即使带有颜色也不能作为染料，因为它不能电离，不能与酸或碱形成盐，对微生物（或其他材料）没有结合力，很容易被洗脱或机械方法除去。染料通常都是盐，分酸性染料与碱性燃料。在微生物染色中碱性染料较为常用，如美兰（亚甲兰）、结晶紫、碱性复红、番红（即沙黄）、孔雀绿等都属碱性染料。 这部分实验着重于细菌的染色观察，同时也进行放线菌、酵母菌和丝状真菌的形态学观察。其目的是使同学在掌握细菌染色观察技术的基础上，了解其它微生物形态结构的观察方法；初步认识各类微生物的形态特征，巩固课堂知识，增强感性认识。 实验一 细菌形态与运动性观察 实验目的： 1、掌握悬滴法、压片法观察细菌运动的技术 2、学会显微镜下辨别细菌的运动性和非运动性 3、通过压片染色，观察细菌的形状 实验原理： 1、悬滴法是普通光镜观察细菌运动的常用方法。过程大致如下：用接种环取适量污水滴在盖玻片上→将盖玻片翻转置于凹玻片上→封闭好后，减弱光圈，观察污水中细菌的形态及运动。 压片法（即水浸片法）:取适当量的污水滴于载玻片上→用干净盖片从一端轻轻放下，将水滴压开（注意防止气泡产生）→置显微镜下观察。 2、镜下观察时，活菌往往都在不断运动，但有些运动是细菌本身的运动而另一些是由于水分子运动而引起的布朗运动。如何区分呢？细菌的运动如鱼在水里游泳，各有一定前进方向，且可以改变运动方向；后者只是由于液体流动而引起的细菌在原来位置上稍有变化的摇摆颤动。 3、细菌的个体微小常常为无色透明，往往需要给其染色、增加色差，以利于观察。另外不同细菌的菌体各部分对某些染料的着色性不一，因此染色还可以区分不同的菌种并识别菌体的各部分。 染色时应注意：①载片干净，无油腻（要求碱洗，酒精泡） ②涂拌的菌体切勿太多 ③加热固定或染色切忌过度或不足 实验物品、器材（提示同学检查自己的实验用品） 显微镜 擦镜纸 香柏油 凹玻片 盖玻片 载玻片 凡士林（或浆糊）滤纸条 玻璃蜡笔 接种环或接种针 污水 做好动球杆菌的成片 盛废物品的平皿 实验过程 1、悬滴法 2、水浸片法（1、2参见实验指导） 3、压片染色法：在前述水浸片法的基础上，观察到细菌的形态后，取下载片，用吸管滴一滴0.1%美兰于盖片边缘，对侧用滤纸条轻吸，染色观察。