微生物显微技术实验..doc

《微生物显微技术实验》实验指导书 第一部分 实验目的 《微生物显微技术》实验课是我院生物工程专业学生的一门重要的基础实验课，是学生进一步深入了解微生物形态与功能关系，将微生物理论与实践应用结合的一门实验课。 《微生物显微技术实验》实验的目的是使学生在掌握微生物学的基本实验方法和技术的基础上，正确的使用实验的仪器设备和掌握微生物显微技术的常规方法，在学生头脑中建立菌株生理和形态鉴定的实验流程，是学生进行后续课程实验和研究的基础。在目前的实验室条件和有限学时的情况下，得到微生物显微实验技术的基本操作和技能训练，培养学生动手操作能力和创新能力。通过微生物显微实验课教学，加深理解和巩固课堂所学的知识，熟悉微生物显微实验的基本操作技术，了解微生物显微实验的基础知识。通过微生物显微实验培养学生观察、思考、分析问题、解决问题的能力，养成实事求是、严肃认真的科学态度、创新精神、创新思维和创新能力。 本实验指导书主要内容包括：细菌芽孢、荚膜、鞭毛的形态观察及染色方法、放线菌和霉菌的菌丝形态观察及染色方法、微生物检测分离及种属鉴定、林木微生物降解菌株实验调查等内容。 整个实验课中贯穿了显微镜使用－灭菌方法－无菌操作－微生物菌种分离筛选鉴定、选育－微生物代谢作用这一主线。微生物显微技术需掌握的基本操作在实验中得到训练，同时加深了学生对所学微生物显微学基本概念的理解。实验设计贴近生活，可以大大提高同学们学习微生物显微技术的兴趣。实验内容与目录如下： 序 号 实验名称 学时 实验类型 实验一 细菌芽孢、荚膜、鞭毛的染色及形态观察 3 基础验证性实验 实验二 酵母菌的形态观察 3 实验三 放线菌和霉菌的菌丝形态观察 3 实验四 酸奶中微生物及双歧杆菌口服液中微生物形态观察 3 设计性 实验* 实验五 发酵罐内赤霉菌菌丝形态变化与代谢关系 3 实验六 环境中产纤维素酶菌株筛选及鉴定 3 * 设计性试验任选一项 第二部分 微生物显微实验规则 微生物显微实验的对象大多为环境微生物，其中某些微生物对人体具有危害性，因此要求进入实验室后必须严格遵守以下实验室规则： 1.进入实验室应先穿白大衣，离开实验室时要脱下白大衣，反折放回原处，不必要的物品不得带入实验室，必须带入的书籍和文具等应放在指定的非操作区，以免受到污染。无菌操作时必须戴口罩，并不得开电风扇。 2．进入实验室进行实验前应先洗手，避免手上的分秘物，食物油，护肤用品和沾染的微生物等对实验造成污染。 3．实验室内禁止饮食、抽烟，不得高声说笑或乱走乱串。 4．各种实验物品应按指定地点存放，用过的器材必须经消毒处理，禁止随意放于桌上或冲入水槽。 5．须送恒温生化培养箱培养的物品，应做好标记（标明姓名、编号、日期、培养时间）后送到指定地点。 6．实验过程中如发生意外事故时，禁止隐瞒或自作主张不按规定处理，应立即报告老师进行正确的处理。如有传染性、腐蚀性的材料污染桌面、地面等，应立即用0.2%-0.5% “84”消毒液浸泡污染部位，作用5～10 min后方可抹去。如手被活菌污染也应使用上述消毒液浸泡5～10 min或肥皂清洗后，再以自来水反复冲洗干净，必要时去卫生所或医院就医。 7．爱护室内仪器设备，严格按操作规则使用。节约使用实验材料，不慎损坏了器材等，应主动报告老师进行处理。 8．实验完毕，应物归原处、将台面整理清洁，将实验室打扫干净。最后以肥皂洗手后方可离开实验室。  第三部分 实验内容 实验一 细菌芽孢、荚膜、鞭毛的染色及形态观察 一、目的要求 1、学习掌握细菌制片的操作技术和无菌操作技术。 2、学习掌握细菌芽孢、鞭毛、荚膜的染色方法。 二、实验原理 细菌的涂片和染色是微生物学实验中的一项基本技术。细菌的细胞小而透明，在普通的光学显微镜下不易识别，必须对它们进行染色。利用单一染料对细菌进行染色，使经染色后的菌体与背景形成明显的色差，从而能更清楚地观察到其形态和结构。 染色前必须固定细菌。其目的有二：一是杀死细菌并使菌体粘附于玻片上；二是增加其对染料的亲和力。常用的有加热和化学固定两种方法。固定时尽量维持细胞原有的形态。 1. 鞭毛是细菌的运动“器官，细菌是否具有鞭毛，以及鞭毛者生的位里和数目是细茵的一项重要形态特征。细菌的椒毛很纤细，其直径通常为0?.?01～0.02 um?，所以，除了很少数能形成毛束（由许多根鞭毛构成）的细菌可以用相差显微镜直接观察到鞭毛束的存在外，一般细菌的鞭毛均不能用光学显微镜直接观察到，而只能用电子显微镜观察。要用普通光学显微镜观寮细菌的鞭毛，必须用鞭毛染色法。 鞭毛染色的基本原理，是在染色前先用媒染剂处理，使它沉积在鞭毛上，使鞭毛直径加粗，然后再进行染色。鞭毛染色方法很多，本实验介绍鞭毛染色法和改良的Uifson?氏染色法，前一种