微生物综训实验报告..doc

实验一、水中菌落总数测定 1 菌落总数测定的目的和意义 食品微生物检验方法为食品监测必不可少的重要组成部分。 (1)它是衡量食品卫生质量的重要指标之一，也是判定被检食品能否食用的科学依据之一。 (2)通过食品微生物检验，可以判断食品加工环境及食品卫生环境，能够对食品被细菌污染的程度做出正确的评价，为各项卫生管理工作提供科学依据，提供传染病和人类、动物和食物中毒的防治措施。 (3)食品微生物检验是以贯彻“预防为主”的卫生方针，可以有效地防止或者减少食物中毒人畜共患病的发生，保障人民的身体健康；同时，它对提高产品质量，避免经济损失，保证出口等方面具有政治上和经济上的重要意义。 菌落总数：食品检样经过处理，在一定条件下（如培养基、培养温度和培养时间等）培养后，所得每g（ml）检样中形成的微生物菌落总数。 菌落总数是指在被检样品的单位重量(g)、容积(m1)或表面积(cm2)内，所含能于某种周体培养基上，在一定条件下培养后所生成的细菌集落的总数。 菌落总数主要是作为判定食品被细菌污染程度的标记，也可以应用这一方法观察食一中细菌的性质以及细菌在食品中繁殖的动态。以便对被检样品进行卫生学评价时提供科学依据． 2 菌落总数测定的几项说明 2.1 菌落总数的测定。是以检样中的细菌细胞和营养琼脂混合后，每个细菌细胞都能形成一个可见的单独菌落的假定为基础的。由于检验中采用37℃于有氧条件下培养(空气中含氧约20％)，因而并不能测出每g或ml检样中实际的总活菌数，厌氧菌、微嗜氧菌和冷营菌在此条件下不生长，有特殊营养要求的一些细菌也受到了限制，因此所得结果，只包括一群能在普通营养琼脂中发育、嗜中温的、需氧和兼性厌氧的细菌菌落的总数。 2.2 鉴于食品检样中的细菌细胞是以单个，成双、链状、葡萄状或成堆的形式存在，因而在营养琼脂平板上出现的菌落可以来源于细胞块，也可以来源于单个细胞，因此平板上所得需氧和兼性厌氧菌菌落的数字不应报告活菌数，而应以单位重量、容量或表面积内的菌落数或菌落形成单位数(colony forming units，CFU)报告之。 2.3 每种细菌都有它一定的生理特性，培养时，应用不同的营养条件及其他生理条件(如温度、培养时间、PH、需氧性质等)去满足其要求，才能分别将各种细菌都培养出来。因此，要得到较全面的细菌菌落总数，应将检样接种到几种不同的非选择性培养基上，并培养在不同条件下，如温度，氧气供应等。但国家颁发的食品卫生标准对不同食品的菌落总数的规定，都是根据用普通营养琼脂进行需氧培养所得的结果确定的，因此在食品的一般卫生学评价中并不要用几种不同的非选择性培养基培养。 3 设备和材料 除微生物试验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下： 3.1 恒温培养箱：36℃±1℃，30℃±1℃。 3.2 冰箱：2～5℃。 3.3 恒温水浴箱：46℃±1℃。 3.4 天平：感量为0.1g。 3.5 均质器。 3.6 振荡器。 3.7 无菌吸管：1ml（具0.01ml刻度）、10ml（具0.1ml刻度）活微量移液器及吸头。 3.8 无菌锥形瓶：容量250ml，500ml。 3.9 无菌培养皿：直径90mm。 3.10 pH计或pH比色管或精密pH试纸。 3.11 放大镜或/和菌落计数器。 4 培养基和试剂 4.1 平板技术琼脂（PCA）培养基 成分：胰蛋白胨 5.0g，酵母浸膏 2.5g；葡萄糖 1.0g，琼脂 15.0g，蒸馏水 1000ml，pH7.0±0.2 制法：将上述成分加于蒸馏水中，煮沸溶解，调节pH。分装试管或锥形瓶，121℃高压灭菌15min。 4.2 磷酸盐缓冲液 成分：磷酸二氢钾（KH2PO4） 34.0g，蒸馏水 500ml，pH 7.2. 制法 贮存液：称取34.0g的磷酸二氢钾溶于500ml蒸馏水中，用大约175ml的1 mol/L 氢氧化钠液调节pH 至7.2，用蒸馏水稀释至1000ml后贮存于冰箱。 稀释液：取贮存液1.25ml，用蒸馏水稀释至1000ml，分装于适宜容器中，121℃高压灭菌15min。 4.3 无菌生理盐水 成分：氯化钠 8.5g；蒸馏水 1000ml 制法：称取8.5g氯化钠溶于1000ml蒸馏水中，121℃高压灭菌15min。 5 检验程序 菌落总数的检验程序见下图。 25ml水样 + 225ml 稀释液，均质 ↓ 10倍系列稀释 ↓ 选择2个～3个适宜稀释度的水样匀液，各取1ml分别加入无菌培养皿内 ↓ 每皿中加入15ml～20ml平板计数琼脂培养基，混匀 ↓ 培养 ↓ 计数各平板菌落数 ↓ 计算菌落总数 ↓ 报告 图二十 菌落总数的检验程序 6 操作步骤 6.1.1 水样的稀释：以无菌吸管吸取25ml水样置盛有225ml磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠