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微生物肥料宁盾在白芍田间试验Protocol.
白芍田间试验protocol
1 实验目的及意义
白芍为常见中药材之一,年需求量在1万吨之上,在种植过程中常有灰霉病发生,造成减产,另外,生长周期长也是制约其产业快速发展的重要因素,一般需种植4-6年才能收获,如何实现中药白芍的高产优质是本试验的主要目的。
(1)通过田间试验分析生防菌剂“宁盾”对白芍的促生以及防病效果;
(2)分析生防菌剂“宁盾”的施用对白芍根围微生态的影响;
(3)分析生防菌剂“宁盾”的施用对白芍品质的影响。
实验假设:生防菌剂“宁盾”的施用能在一定程度上促进白芍的生长,包括根系更长、更粗壮,分支更多等;在有病害压力的情况下还能起到一定的防病效果;生防菌剂“宁盾”的施用能改变白芍的根围微生态,增加有益菌的种类和数量;在提高产量的同时,还能保证白芍的质量,表现为有效成分含量增加。
2 实验材料
2.1实验对象
白芍(由江苏省句容市天王镇金山中药材种植基地提供)
2.2 实验药剂
生防试验菌剂——“宁盾”,由南京农大生物源农药创制有限公司提供。
生防菌剂对照品——木霉菌肥效剂,由山东省科学院生物研究所研制提供。 试验菌剂——“宁盾”共设4个浓度梯度:
A.25倍稀释液(浓度:8×106CFU/mL);
B.50倍稀释液(浓度:4×106CFU/mL);
C.100倍稀释液(浓度:2×106CFU/mL);
D.150倍稀释液(浓度:1.3×106CFU/mL);
E.生防菌剂对照品——木霉菌肥效剂400倍稀释液(浓度:5×105CFU/g)
F.化学对照(50%多菌灵800-1000倍液);
G.清水对照。
3 实验方法
3.1 生长指标及产量测定
11月初,选其形状粗大,芽头饱满的,纵切成数块,每块带有粗壮的芽苞2-3个,供种苗用。处理组用生防菌剂“宁盾”30倍稀释液浸泡5 min;生防菌剂对照组用木霉菌肥效剂200倍稀释液浸泡5 min;化学对照用50%多菌灵800倍液浸泡5 min;清水对照组用清水代替。晾干备用。
按行株距50 cm×40 cm挖穴,芽头向上,埋入穴内,覆土4 cm左右,每亩种植2500-3000株(约4株/m2),用种秧约100 Kg。试验共有7个处理,每个处理3个重复,每个重复30m2,约120株苗,栽后处理组用生防菌剂“宁盾”的稀释液(25倍、50倍、100倍、150倍)灌于根部,每株用量约150mL;生防菌剂对照组用木霉菌肥效剂400倍稀释液灌于根部;化学对照组用白芍生产上的常规药剂进行防治(发病初期喷50%多菌灵800-1000倍液,或50%托布津1000-1500倍液,每隔10天1次,连喷2-3次。),对照用清水代替。第2-4年,每年4、7、10月各处理1次,并对株高、茎粗、分枝数等生长指标进行检测。株高为植株水平位至高点到茎基部地面的距离;茎粗统一按近地面5cm进行测量;分枝数按一级分枝计算。采用5点取样法,自每个重复中随机选择50株进行测量。第4年10月底采收,统计各处理组白芍根皮的产量,计算增产效果。
3.2 防病效果统计
白芍收获时,采用五点取样法,每点选取10株,根据灰霉病的病害分级标准统计病情指数,并计算病害严重度,分析各处理组的防治效果。
病害分级标准:
0级:无病斑;
l级:病斑占叶面积的5%以下;
3级:病斑占叶面积的6~15%;
5级:病斑占叶面积的16~25%;
7级:病斑占叶面积的26一50%;
9级:病斑占叶面积的50%以上(或叶柄折断)。
. 病害严重度 (%)=∑ (各级病叶数 × 相应级数值)/调查总叶数 × 最高级数值× 100%
防治效果 (%)= ( 对照病害严重度 - 处理病害严重度 ) / 对照病害严重度 × 100 %
3.3通过变性梯度凝胶电泳(denaturing gradient gel electrophoresis,DGGE)检测“宁盾”处理对白芍根围微生物群落的影响
3.3.1 土壤样品的采集
在“宁盾”施用前、施用0天、3天、10天、30天、60天、收获时对所有处理(包括对照)分别取样。每个处理取3个重复的样品,每个重复采用5点取样(5个点在取样范围内尽量分散)。取样时,将植株根部的土轻轻抖落,去掉大块土壤,将须根及粘附在须根上的土壤一起装入纸袋并贴上标签。最终用于检测的根围土样品包括根系以及紧紧附着于根系上的土壤。
(采样时应记录以下信息:白芍的播种期,取样期,白芍的品种,以及施用过的药剂、肥料,并画下采样示意图。尽可能的记录土壤类型,样地经纬度,海拔高度等数据。)
3.3.2 土壤总DNA的提取
采集的根围土样品带回实验室迅速处理,首先所有样品2 mm过筛。然后分别取0.5 g 样品根据说明采用Fast DNA Spin Kit for S
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