双光径免疫浊度分析仪测定尿视黄醇结合蛋白2..doc

双光径免疫浊度分析仪测定尿视黄醇结合蛋白 吴俊渊, 郭新荣, 陈彤, 曹兴建*（南通大学附属第二医院检验科 江苏南通226001） 摘要:目的　评价国产试剂在双光径免疫浊度分析仪（IMMAGE 800）上检测尿视黄醇结合蛋白（RBP）的可行性。方法　对瑞源公司生产的RBP试剂在IMMAGE800上的检测精密度、准确性、线性、干扰性进行评价，并与日立7170型自动生化分析仪（7170）的检测结果进行相关性分析。结果　低值、高值RBP的批内CV分别为4.78、3.47，批间CV分别为6.78、5.70；在RBP浓度为0.62和2.36mg/L的2份样本中, 加入2.50mg/L 的标准品, 其回收率分别为90.6%、96.4% ；用高浓度的参考物作线性测定，7170与IMMAGE800的检测范围分别为：0.25 mg/L～7.80 mg/L和0.16 mg/L～9.20 mg/L之间；在尿液中Hb 5.0g/L时,对本法无明显干扰。40份标本分别在7170和IMMAGE800上检测RBP，结果经配对资料t检验，两者存在显著差异(P0.01)，将两组数据进行线性回归分析，显示出良好的相关性，回归方程为Y =0.9064X +0.098，γ=0.991，P0.01。结论　应用国产试剂在IMMAGE800上检测尿RBP，其精密度、准确性、线性、均符合临床要求，与7170的检测结果相比有良好的相关性,且具有更高的检测上限，可以替代7170型自动生化分析仪的检测。 【关键词】：视黄醇结合蛋白 IMMAGE特定蛋白仪 速率散射比浊法 方法学评价 视黄醇结合蛋白（RBP）为低分子量蛋白,正常人血浆中90%的RBP 与前白蛋白结合,不能透过肾小球滤出,游离状态的RBP经肾小球滤出几乎全部被肾小管重吸收,因此正常尿液中含量很低 。由于RBP 相对分子量小,在酸性尿中十分稳定,被认为是最敏感的近曲小管的损伤标志[1-2] ，在临床上具有广泛的应用前景。检测尿RBP水平的方法较多，包括酶免法(EIA)、放免法(RIA)、免疫透射分析法,免疫散射分析法等[3]。EIA 、RIA等操作繁琐，不易于自动化，不适宜临床常规检测。免疫透射分析法是较为常用的方法，但该法检测灵敏度较低，存在钩状效应等弊端。IMMAGE800双光径免疫浊度分析仪具备散射和透射两套光路以及抗原过剩自动检测系统，是目前测定特定蛋白的较先进的仪器，但RBP的检测还没有试剂盒提供。我们开发该仪器的科研通道，利用国产试剂中的抗RBP抗体，建立了速率散射比浊测定尿RBP浓度的方法，并与日立7170型自动生化分析仪（7170）免疫透射检测系统的检测结果进行比较分析。 1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 仪器 日立7170型自动生化分析仪(日本)；双光径免疫浊度分析仪（BECKMAN IMMAGE 800）(美国)。 1.1.2 试剂及校准品 RBP检测试剂、标准品均由宁波瑞源公司提供; UDR（自定义）试剂盒________________________ 作者简介：吴俊渊，男，1963年出生，副主任技师，现主要从事生化免疫方面工作。电话：051385838196 通讯作者：曹兴建 Email:ntcaoxh@163.com 以及配套的缓冲液buffer 1、稀释液dilution 1,由贝克曼库尔特公司提供。 1.1.3 样本收集来源于临床检测样本,其浓度选择符合EP9-A[4] 文件数据分布建议的要求。 1.2 方法 1.2.1 免疫透射比浊双试剂终点法在7170上完成。将4.0 mg/ L校准品按倍比稀释为2.0，1.0，0.5，0.25 及0 mg/L作6 点定标。基本测定参数: 主波长340nm ,副波长700 nm ,比色皿光径0.7cm。尿液经离心沉淀后取上清液进行测定。加样量: 尿样/ 校准品∶试剂1∶试剂2 = 8μl∶240μl∶60μl 。加入试剂1 5min后加入试剂2 ,反应时间5min 。 1.2.2 速率散射比浊在IMMAGE800上完成。先将上述稀释好的6点定标品放入IMMAGE的样品盘中,利用国产试剂中的抗RBP抗体（试剂2），参照其提供的相关参数，样品和标准品的加样量设定为6μl ，试剂1的用量设定为200μl，改变试剂2的用量，分别设计为30ul、40 ul、50 ul、60 ul和80 ul进行实验比较，结果当尿样/ 校准品∶试剂1∶试剂2 = 6μl∶200μl∶50μl时,线性最佳。进入IMMAGE的用户自定义试剂(UDR)系统,使用自建的用户自定义检测项目,进行参数设置，样本中加入试剂1 5min后进入IMMAGE 800的速率散射比浊程序，读测时间由仪器自动控制。配置5%的正常人血清，作为抗原过剩检测试剂，设置用量5μl。仪器通过