不同TNM分期恶性肿瘤患者外周血CD4+CD25+CD127-调节性T细胞的研究不同TNM分期恶性肿瘤患者外周血CD4+CD25+CD127-调节性T细胞的研究.doc

不同TNM分期恶性肿瘤患者外周血 CD4+CD25+CD127-调节性T细胞的研究 康文喜 樊静 王小聪 河北省秦皇岛市肿瘤医院 邮编：066004 　 摘要： 目的 探讨不同TNM分期恶性肿瘤患者外周血CD4 +CD25+CD127-调节T细胞变化及其临床意义。方法 通过流式细胞术动态分析179例恶性肿瘤患者外周血T细胞亚群和CD4+CD25+CD127-调节性T细胞变化。结果 不同TNM分期的恶性肿瘤患者在疾病进展过程中外周血CD4+CD25+ CD127-细胞占CD4+细胞的比率升高, 在肿瘤第Ⅳ期尤其明显(P 0.01)；Ⅰ期和Ⅱ期病人CD4+细胞略低于对照组,但差异无显著性意义(P 0. 05) , CD4 /CD8比值低于对照组,差异有显著的统计学意义(P 0. 01) ；III、Ⅳ 期病人CD4+细胞及CD4/ CD8比值均明显减低, 差异有显著性意义(P 0. 01) ;各期肿瘤患者CD3+、CD8+、CD19+ 细胞与对照组比较无显著性差异(P 0. 05)。结论：恶性肿瘤患者外周血CD4+CD25+ CD127-调节性T细胞占CD4+T细胞比率的升高与恶性肿瘤临床分期密切相关，定期检测外周血中上述指标的变化, 有利于了解恶性肿瘤患者的病情变化及预后，下调该比例或许是一种有效的治疗肿瘤的新方法。 关键词 恶性肿瘤 CD4+CD25+CD127-调性T细胞 淋巴细胞亚群 流式细胞仪 CD4+CD25+调节性T细胞（regulatory T cell Treg）是一类重要的免疫调节细胞，免疫抑制性调节作用是其典型的功能特征，在维持机体免疫平衡、预防自身免疫性反应和疾病的发生中发挥关键作用。研究表明，Treg与肿瘤免疫耐受机制相关，许多肿瘤外周血和肿瘤组织局部调节性T 细胞增高[1-12]。本研究利用流式细胞术对比分析不同TNM分期的恶性肿瘤患者外周血淋巴细胞亚群及Treg变化，探讨其与肿瘤病情及临床转归的关联性。 材料与方法 1.1 研究对象 179例恶性肿瘤患者为2008年2月至2010年5月本院住院患者，男92例，女87例；年龄36～72岁，平均（52±9.8）岁。所有患者均经病理学证实且不伴有自身免疫性疾病。179例恶性肿瘤中：腺癌44例，黏液癌35例，未分化癌18例，浸润性导管癌82。临床分期：Ⅰ~Ⅱ期67例、Ⅲ期73例、Ⅳ期39例。所有患者近一个月未接受抗肿瘤治疗，近三个月未使用过免疫增强剂。选取同期我院健康体检者30例作为对照组，其中男性16名，女性14例。年龄（48±12）岁。 1.2 主要试剂及仪器 流式细胞仪—EPICS XL为美国贝克曼库尔特公司（BECKMAN COULTER）产品。CD4-FITC、CD8-PE、CD3-PC5、CD19-PE、CD4-PC5、CD25-FITC CD127-PE等荧光标记单克隆抗体、同型对照IgG1或IgG2荧光抗体、红细胞裂解液等试剂均为美国贝克曼库尔特公司出品。 1.3实验方法： 所有观察对象均于清晨空腹抽取静脉血2ml，EDTA-2K抗凝，使用直接免疫荧光标记法标记细胞并进行流式细胞分析：简言之，根据不同标记组合，取不同荧光标记的单克隆抗体各2 0μl，加入100μl EDTA-2K抗凝的外周血，室温下孵育15min，再加入红细胞裂解液孵育10 min，加入PBS 500μl洗两次，离心弃上清，再加入PBS 500μl，混匀后上机检测。　 1.4 统计学处理　实验结果采用t检验进行统计学分析，统计学差异确定为p＜0.05。 2.结 果 2.1 不同TNM 分期恶性肿瘤患者外周血调节性T细胞分析：外周血CD4+ CD25+CD127-占CD4+T细胞水平明显升高,Ⅳ期患者尤其明显，统计学有显著差异(P 0. 01)。 2.2 不同TNM分期的恶性肿瘤患者外周血T淋巴细胞亚群分析：Ⅰ、Ⅱ期患者CD4+阳性细胞比例低于对照组，差异无显著性意义（p﹥0.05）。CD4/CD8比值低于正常组，差异有明显差异（p＜0.05）；Ⅲ期和Ⅳ期患者外周血CD4+、CD4/CD8比例均明显降低，差异有显著性意义（p＜0.01）；各期患者CD3+ 、CD8+、 CD19+细胞亚群与对照组无显著性差异（p﹥0.05）。 表1 不同TNM分期恶性肿瘤患者外周血淋巴细胞群分析（.x ±s） 分 组 N CD3+ CD4+ CD8+ CD4+/CD8+ CD19+ 、 CD4+CD25highCD127-占CD4+T% 对 照 30 72.03±90.3 42.56 ±9.65 27.50 ±6.66 1.92 ±0.30 10.67±6.16 4.14±0.85 ⅠⅡ期 67 68.55 ±13.50 38.50 ±13.