z72第二章蛋白质化学报告.ppt

2D 蛋白质电泳 CK V991 单分子蛋白质颗粒:直径1—100nm. 蛋白质具有胶体的特征:布朗运动、丁达尔效应以及不能透过半透膜 稳定蛋白质水溶液的因素： （1）水膜：AA极性基团,如NH3+、COO-、OH、SH、CONH等易吸附水分子，在蛋白质颗粒外面形成一层水化层。 （2）电荷：在非等电状态时，蛋白质带同种电荷相互排斥。 二、蛋白质的胶体性质 1、 盐析 盐析：向蛋白质溶液中加入高浓度的(NH4)2SO4、Na2SO4、NaCl等中性盐,破坏蛋白质分子表面的水化层，中和他们的电荷，而使蛋白质沉淀析出的现象。即加入高浓度中性盐使蛋白质沉淀析出的现象 　　　　 沉淀蛋白质的方法有以下几种: 三、蛋白质沉淀反应 日常生活中的应用？ 分段盐析：不同蛋白质所带电荷和亲水性不同，析出时需要的盐浓度不同，调节中性盐浓度使混合蛋白质溶液中的几种蛋白质分段析出的方法。 盐溶：低浓度中性盐增加蛋白质溶解度的现象。（会增加蛋白质分子表面的电荷，增强蛋白质分子与水分子的作用，从而使蛋白质在水溶液中的溶解度增大。） 2、有机溶剂沉淀 乙醇、甲醇、丙酮等极性有机溶剂降低介质的介电常数，破坏蛋白质水膜（乙醇等有机溶剂亲水性更强，脱水剂）,使蛋白质沉淀。 3、重金属盐沉淀 Hg2+、Pb2+、Cu2+、Ag+等重金属离子可与蛋白质中带负电荷 （pHpI时）的基团形成不溶性的盐而沉淀。 误服重金属盐的病人可口服大量牛奶、生蛋清等，防止这些有害离子被吸收。 4、生物碱试剂沉淀 生物碱试剂,如苦味酸、单宁酸或三氯乙酸等可与蛋白质中带电荷的基团生成不溶性的盐而析出沉淀。（日常饮食注意） 四、蛋白质的变性与复性 蛋白质变性： 受到某些理化因素的影响， （1）分子构象发生变化  （二级以上的高级结构改变) （2）理化性质和生物学功能改变 （3）共价键不断裂（一级结构不  变，组成成分和分子量不变）  变性的实质：由于外界条件破坏了Pr内部的次级键使有序而紧密的结构变为无序而松散的结构。 引起Pr变性的因素： 物理因素：加热、剧烈搅拌、紫外线照射、X射线、超生波 化学因素：强酸、强碱、重金属盐、生物碱、有机溶剂等。 （1）生物活性丧失，eg. 酶 （2）溶解度降低，粘度增加,扩散系数降低,易凝聚 （3）光学性质变化：Pr分子内的侧链基因暴露到分子表面，从而出现光谱变化 （4）生化性质改变：易被Pr E水解 蛋白质变性后的特征： （1）大豆Pr溶液加热加盐（MgCl2)制成豆腐。 （2）分析非Pr成分时，常用三氯醋酸将样品中的Pr变性沉淀除去。 （3）紫外线照射或人体衰老，Pr变性，亲水性渐弱，皮肤失去弹性。 （4）酒精中毒、杀菌。 蛋白质变性的应用: 复性：当若引起变性的因素较温和，当除去这些因素后， Pr重新自发折叠恢复原来的构象的现象。 1、双缩脲反应 双缩脲反应: 双缩脲在碱性溶液中能与CuSO4反应生成红紫色络合物的反应。 一般含有两个或两个以上的肽键的化合物与CuSO4碱性溶液发生双缩脲反应生成红紫色络合物,是肽和蛋白质所特有而AA没有的颜色反应。用于蛋白质或肽的定性和定量测定。 五、蛋白质的呈色反应 蛋白质的酪aa酚基能将福林试剂中的磷钼酸和磷钨酸还原成蓝色化合物（钼兰和钨兰的混合物），这一反应常用于蛋白质微量测定。 3、 茚三酮反应(同AA反应) 蛋白质的? -AA能与水合茚三酮生成蓝紫色化合物 4、 紫外吸收 2、 酚试剂反应 第六节、蛋白质的分离、纯化和鉴定（自学） 一、名词解释 肽键 肽平面 氨基酸残基 pI 电泳 盐溶 盐析 蛋白质的变性与复性 二、符号解释及结构式 Gly Asp Trp Pro Gln Glu  Arg Met Phe GSH Cys 三、蛋白质二级结构的基本类型有哪些？简述其特点。 四、蛋白质结构的层次是怎样区分的，简要说明之。 五、蛋白质变性的实质是什么？蛋白质变性后有哪些现象？举出几个蛋白质变性的实例。 * * Q sw Pipecolic acid 派啶酸，一种非蛋白质AA。 * * Ψ　psai Φ φ fai ※ GS－SG 蛋白质一级结构的测定(了解） 1、样品预处理：样品须纯化，测分子量，加入含巯基乙醇的高浓度尿素溶液，使Pr分子中的二硫键和非共价键断开。 2、测定AA组成：样品用6mo