薄层板的制作.ppt

我们综合应用上述指纹图谱分析方法、多指标成分含量测定与经典质量控制方法相结合，建立了中药复杂体系整体质量控制的新模式 * * * TLC—bioautography 人们最早采用纸色谱一生物自显影技术对抗菌药物进行筛选，而后发展到采用薄层色谱与生物显色剂联合用于食品、工业污染等微生物的测定以及各类天然抗菌成分的筛选，此外，在胆碱酶抑制剂和抗氧化剂的筛选等方面都得到广泛应用。1967年，Galvind等提出以l，l-二苯基-2一苦肼基自由基(I，1一diphenyl一2一pierylhydrazyl，DPPH)为显色剂，定量测定清除自由基活性的想法，在第十届国际油菜籽会议上提出该方法，指出该方法与视频扫描技术联用可以用于油菜籽的抗氧化活性评价。 TLC—bioautography DPPH是一种很稳定的以氮为中心的自由基，若被测物能清除它，则提示被测物具有降低羟自由基、烷自由基或过氧自由基等自由基的有效浓度，打断脂质过氧化链反应的作用¨“。DPPH本身显紫色，具有清除DPPH自由基能力的物质能使其还原成DPPH—H而呈现黄色。目前，国内外广泛采用DPPH分光光度法筛选天然抗氧化剂。 * (七) 薄层层析的定量测定 展开后，薄层分离所得斑点中化合物可进一步定量，其测定方法可分为两大类： 一类为洗脱测定法，将所需测定的斑点中的组分用适当溶剂洗脱，再选用适当方法定量； 另一类为直接测定法，色谱分离后，直接用肉眼观察比较或用仪器扫描斑点而测定其含量。 1 洗脱测定法 1 斑点的定位 2 斑点的洗脱:用吸集器将斑点位置的吸附吸下，然后用洗脱溶剂洗脱。 3 测定 (1)紫外分光光度法：洗脱液调整至一定体积，在此化合物最大吸收波长处测定。同时把样品斑点相应位置薄层吸附剂同样取下做空白对照。 (2)比色法：选择灵敏度高、专属性好的比色反应测定化合物含量，是比较常用的方法。 (3)其它方法：极谱、库仑滴定、荧光测定等。 吸集器及减压洗脱装置 吸集器 减压洗脱 * 2 直接测定法 1 目测法 样品经色谱分离后，直接观察所得斑点的大小和颜色的深浅，并与标准品在相同条件下展开所得到的一系列已知不同浓度的标准斑点相比较，而近似地判断样品中所测成分的含量。 2 测面积法 展开后色谱上的斑点面积与化合物含量间，符合一定的线性关系。 3 仪器测定法 3 仪器测定法 用光密度计或称薄层扫描仪（TLC Scanner）扫描定量，该方法已成为薄层定量的主要方法。 1.吸收测定法 展开后的薄层，用一定波长单色光束进行扫描，记录其吸光度的变化，得到扫描曲线。 利用样品扫描曲线上峰高或面积与标准品相比较，可得出样品含量。 2.荧光测定法 化合物本身有荧光或经过适当处理后生成荧光化合物者可测量其荧光强度而进行定量。 3.荧光淬灭法 由荧光减弱的程度测出斑点中化合物的含量 中心实验室的仪器 吸收测定法的分类 根据对光测定方式的不同，可分为三种： 透射法 反射法 透射—反射法 透射法扫描 反射法扫描 L 光源；MC 单色器；P 薄层板； S 斑点； PD 光电检测器 * 仪器测定法的两个重要参数 扫描波长： (1)单波长扫描：使用一种波长的光线对薄层进行扫描。 (2)双波长扫描：是采用两种不同波长的光束先后扫描所要测定的斑点，并记录下此两波长吸光度之差。 扫描轨迹： 直线扫描、锯齿状扫描、圆形扫描 化合物斑点的吸收光谱 单波长与双波长扫描曲线的比较 四 特殊的薄层 1. 高效薄层色谱（HPTLC） 2. 棒状薄层色谱（Rod-TLC） 3. 超薄层色谱 （Ultra Thin-layer Chromatography） trimethylsily * (一) 薄层层析用的吸附剂 常用的薄层层析吸附剂有硅胶、氧化铝、纤维素、聚酰胺等。 吸附剂的选择：首先决定于样品成分的性质，即它们的溶解性、酸碱性、极性以及是否与吸附剂起化学反应等； 其次要考虑吸附剂、载体是否容易得到及其价格等。 * * 层析板是用专门的涂布器把浆状的吸附剂（纸浆、纤维素、硅胶、中性氧化物、聚酰胺、多孔性玻璃粉，硅烷化键合硅胶等）均匀地涂在在薄层板（玻璃板、金属板或弹性塑料板）上，干燥（110℃活化）后即可使用。 (二) 薄层板的制作 * (三)薄层层析中展开剂的选择 主要根据极性的不同来选择流动相展开剂。 各种展开剂按其极性不同排序为： 烷烃烯烃醚类硝基化合物二甲胺酯类