外源基因表达系统完善。.ppt

（一）真核生物基因的表达调控的特点 1. DNA量大，不存在操纵子结构 （二）转录前表达调控 发生在基因组水平上的基因结构的改变。包括基因 丢失、基因扩增、基因重排、甲基化修饰及染色质 结构影响。 常用的酵母启动子： 与糖代谢相关的启动子： 3-磷酸甘油醛脱氢酶基因的启动子（GAP）甘油激酶基因启动子（PGK） 酸性磷酸酶基因启动子（POH5） 与醇代谢相关的启动子， 醇氧化酶基因启动子（AOX，MOX） Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. （1）提高外源基因在酵母中的表达水平 b.提高外源基因表达盒在宿主中的拷贝数 提高外源基因在宿主的拷贝数对基因的表达水 平有明显的影响，一般来说拷贝高的表达量也 高。 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 提高外源基因拷贝的方法 ？利用酵母天然的内源多拷贝质粒，如酿酒酵母的2um质粒，可以达到60～100个拷贝以上。但是这种内源质粒连上外源基因后在非选择性培养基会存在不稳定的想象，有时拷贝数会低于10个以下。 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 提高外源基因拷贝的方法 ？利用酵母基因组中的多拷贝重复序列进行整合获得多拷贝。不是所有的酵母都有天然的内源多拷贝质粒，但是所有的酵母都有多拷贝重复序列。如利用rDNA序列作为整合位点可以达到60～100个拷贝以上。在非选择性培养基也十分稳定。 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 作为基因表达的宿主需要具备的条件： 安全无致病性 有较清楚的遗传背景，容易进行分子操作 容易进行载体的导入 培养条件简单，容易进行高密度培养 有良好的蛋白质分泌能力 有类似高等真核的翻译后修饰功能 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 二、酵母表达载体的基本结构 由于大肠杆菌的的转化简单、高效，质粒的制备方便，因此酵母的表达载体为了操作上的简单，一般都是构建成带有大肠杆菌质粒基本骨架的酵母－大肠杆菌穿梭载体。 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 酵母表达载体的构件： DNA复制起始区 选择标记 整合介导区 有丝分裂稳定区 表达盒 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. （一）DNA复制起始区 这是一段具有功能的DNA复制起始的DNA序列。这种序列通常来自酵母的2u质粒的复制起始位点或酵母基因组中的自主复制序列（autonomously replication sequence，ARS）。 DNA复制起始区能使载体在细胞具有复制并分配到子代细胞的能力。 整合型载体中不需要DNA复制起始区，单在非整合型载体中是必不可少的。 Eval