你所不了解的番茄红素__培训课件.ppt

* 番茄红素最大吸收峰的波长约为472一484nm虽然在较短波区和较长波区的吸收也很强，但比最高峰弱，所以人们经常将样品溶解在石油醚或正己烷中，在最大吸收波长下，用分光光度计测定溶液的吸光度，以此来表征番茄红素的浓度，用摩尔消光系数计算番茄红素的含量。 * 此法不需要昂贵的番茄红素标准品，而且操作简便，适宜番茄红素粗提阶段的浓度测定。由于与番茄红素共存的其它类胡萝卜素如β一胡萝卜素在472nm处也有一较强的吸收峰，这会对测定产生干扰，引起较大的系统误差。 * 2.色谱法 色谱法是分离分析天然色素的常用方法，是由俄国植物学家茨维特在分离植物色素的过程中发现的，它利用混合物中各组分物理化学性质的差别，如吸附力、分子亲和力、分配系数等，使各组分以不同的速度移动而达到分离目的，色谱法不仅能对番茄红素进行定性的分析，还可以对番茄红素进行定量的分析。 * 2—l平床色谱 (1)纸色谱:此法设备简单，操作易行，成本低廉，分析完后可作为永久性证据，所以可用于番茄红素的定性分析。选择合适的展开剂是分离的关键，果秀敏等人通过色素分离的研究，认为用以下展开剂效果较好: 石油醚:乙醚:乙醇 1.5:6.5:2.5 石油醚:苯:丙酮 3:3:1 * 由于受多种因素如固定相和流动相组成、操作温度等影响，番茄红素的比移值Rf定性比较困难，往往需要以待测组分的标准物质与样品液一同点样进行定性，如果没有标准品，可将分离出的各个组分洗脱，洗脱液在紫外分光光度计上进行扫描，根据最大吸收峰的位置确定样品组成。 * (2)薄层色谱:与纸色谱相比，薄层色谱分离迅速，效率高，灵敏度高，而且可用于制备和定量分析，许多天然色素如叶绿素、类胡萝卜素及香豆素等都可用薄层色谱进行分析。薄层色谱固定相常用氧化铝、硅胶和聚酞胺等，流动相的选择要根据固定相和被分离物质的关系，番茄红素属于强亲脂类物质，若在硅胶、氧化铝等极性溶剂上进行分离展开，必须选用极性较低的展开剂，如石油醚、正己烷苯丙酮等由于番茄红素见光容易分解所以展开过程中应避光。 * 薄层分离后，可用2.8%的硝酸银一甲醇溶液进行显色，斑点颜色在甲醇挥发后会有变化，以此可以区别。α一胡萝卜素、β一胡萝卜素异构体。Teodor等人用硅胶板对番茄红素提取液进行分析，以15%丙酮一石油醚溶液和纯石油醚作为流动相两步展开分离，最后的分离结果经CS一900双波长薄层扫描仪分析，并与标准品对比， Rf(番茄红素)为0.90， Rf(β一胡萝卜素)为0.96。 * 有时番茄红素的Rf值过大，不能用正相色谱分离时，可采用反相系统，即用亲脂溶剂(石蜡油、煤油、硅酮油、橡胶等)浸泡层析板，用含水的醇域与此极性相近的溶剂作为展开剂。 * 2—2柱色谱 柱色谱包括气相色谱和液相色谱，目前应用最广也最适用于天然色素分离的是高效液相色谱(HPLC)，它具有分离效能高，分析速度快，样品用量少等优点，同时又不像气相色谱受样品的沸点、挥发度和热不稳定性的限制，所以常用于番茄红素的分析和半制备。由于番茄红素是一种亲脂性很强的烃类，研究人员常用反相液相色谱进行分离测定。 * 目前研究报道的高效液相色谱分析番茄红素的条件如下: 固定相:C18(250X4.6nm) 流动相:甲醇、乙睛、四氢吠喃、二氯甲烷等 载液流速:0.6一1.2ml/min 进样量:10一20μl 检测波长:450nm 流动相不同组分的保留时间就不同。 * 用高效液相色谱分析检测番茄红素必须有番茄红素的标准品，确定它在某一流动相的保留时间，番茄红素的提取纯化工艺及稳定性研究绘制出浓度与峰面积的标准曲线，根据保留时间和标准曲线得出样品中番茄红素的含量.番茄红素标准品比较昂贵，有时也可用其它与番茄红素吸收波长相近的色素代替番茄红素作为标准品，如苏丹红。 * 番茄果实提取物的C30HPLC色谱图 色谱条件：固定相：YMCTM Carotenoid S-5柱（YMC，250×4.6 mm ,5m）；流动相A：乙腈∶水= 9∶1；流动相B：乙酸乙酯；线性梯度洗脱：在前15分钟内，B由0%增为100%，随后，B保持100%；流速为1.0毫升/分，检测波长为470 nm；进样量为20微升；室温。组分鉴定I=β-胡萝卜素；Ⅱ=全反式番茄红素； III/IV/V=顺式番茄红素。 back * 五 番茄红素的前景展望 目前，保健食品越来越受到人们重视，保健食品市场的崛起使得传统的医药行业面临挑战，生病服药的概念正遭受到以预防疾病为主概念的冲击。特别是当今人们更加注重天然植物的活性成分对疾病的预防作用，更注重饮食对健康的重要性。番