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(3)NS1 蛋白与宿主细胞凋亡的关系 NSl 蛋白通过上调表达PKR 细胞内抑制物的浓度来抑制PKR 的激活,或是通过直接结合PKR 和抑制IRF23 ( IFN regulatory factor3 ,IRF3) ,来抑制PKR 的激活,从而延缓细胞凋亡。 (4)NS1 蛋白的干扰素及肿瘤坏死因子的颉颃作用 流感病毒NSl 基因在抑制干扰素、细胞因子和NF2κB 通路中发挥了关键性作用。 NS1 蛋白可作为一种鉴别诊断标志,通过检测抗NS1 蛋白的抗体来区分野毒感染和疫苗免疫,并可作为早期感染的依据。 3 禽流感病毒抗原的变异与效应: (1)禽流感病毒抗原变异 1.1点突变 流感病毒的RNA复制酶缺乏校正阅读能力,编码HA和NA蛋白质的基因非同义替换的积累使其基因容易发生突变而发生抗原漂移. 流感病毒HA 基因的突变率较高,据估计,每个复制周期中每个核苷酸的突变几率为2 ×10- 3 ,也就是说病毒每复制一代, HA基因上大约有一个碱基发生变异. 1.2基因重排 A型流感病毒是分节段、单股负连的RNA病毒,有8个基因片段. 当2个或2个以上的不同病毒粒子同时感染1个宿主细胞时,在病毒的增殖过程中,不同毒粒子的8个基因组片段可以随机相互交换,从而发生核酸片段水平上的重新组合,理论上通过基因片段的重排有可能产生256种遗传不同的子代病毒. 在自然界,这种混合感染的现象比较常见,例如日本在20世纪80年代和90年代曾从发生猪流感(H3N2 , H1N1 )混合感染的猪群中分离到H1N2 基因重组型流感病毒. 通过基因重排有可能产生高致病力的毒株,幸运的是,迄今为止,造成严重损失的均为H5 和H7 亚型. (2)禽流感病毒抗原变异引起的效应: HA受体结合位点变异 切割位点附近的氨基酸变异 HA切割位点附近的潜在糖基化位点改变 4 致病机制: 流感病毒的感染过程 吸附、穿膜与脱壳 与病毒表面蛋白血凝素有关 血凝素裂解为两个由二硫键连接的亚基(HA1与HA2)是诱发感染的前提 流感病毒的受体结合部位(receptor binding site)位于HA头部顶端 细胞受体是位于细胞膜糖蛋白或糖脂链末端的唾液酸 血凝素结构 流感病毒的复制及调控 只有当vRNA与NP同时存在时,vRNA才可转运到细胞核内 NP、RNA聚合酶亚基和NS1在感染后最初数小时即生成 其他蛋白质如HA、NA、M1、M2和NS2合成较晚 流感病毒在特定时间内合成的蛋白成分均要通过宿主细胞的介入进入核内完成vRNP的组装 M1是vRNP向核外转运的动力,只有在细胞中合成M1,并且进人细胞核后才发生vRNP的核外转运 病毒的组装、成熟与释放 NP在细胞浆内合成后 ,很快进人细胞核与vRNA结合形成核壳体 M1蛋白合成后到达细胞膜,紧贴于细胞膜内侧面 病毒膜蛋白合成后先要进行结构上的修饰和加工 ,然后被转移到宿主细胞膜上 病毒以出芽方式释放子代病毒颗粒 流感病毒感染发病机制 流感病毒感染和病毒复制主要在上呼吸道上皮细胞,但常引起机体局部炎症和全身性反应 机体反应主要与炎症性细胞因子、趋化因子、诱导性一氧化氮合酶(iNOS)、粘附分子和微小纤溶酶表达与活化有关 激活p53和phosphatidylinositol 3 - kinase ( PBK) /Akt信号通路诱导病毒的增殖 诱导IKK-NF-κB信号通路,利于病毒复制 直接激活Fas/FasL细胞凋亡信号,导致细胞的凋亡 NS1蛋白能通过作用于其特定的靶目标,例如NF-κβ、PKR及IRF3等来激活干扰素所诱导的连锁反应,从而促进细胞凋亡 禽流感的诊断技术 禽流感的确诊主要依据实验室方法,实验室方法诊断方法主要包括病原学,血清学和分子诊断三部分。 病原学检测技术 1病毒的分离培养 病毒的分离培养是检测禽组织中AIV 的一种经典、准确、敏感的病原学诊断方法,可以作为AIV 检测的标准。 目前常用的方法有鸡胚分离培养和细胞培养。 缺点:检测周期长,操作程序繁杂,不适用于该病的快速诊断。 2神经氨酸酶促试验 利用AIV囊膜表面的NA能够水解含有N—乙酰神经氨酸的底物来检测病毒的存在与否。 优点:特异性强,检测结果十分可靠。但该方法并未被广泛应用到临床中 血清学诊断技术 血凝与血凝抑制试验 神经氨酸酶抑制试验 酶联免疫吸附试验 免疫荧光技术 中和试验 琼脂扩散试验 分子诊断技术 RT-PCR 和Realtime RT-PCR 荧光RT-PCR、 RT-PCR-ELISA 依赖核酸序列的扩增技术(NASBA) 环介导的等温扩增技术(LAMP) 基因芯片技术 防治措施 加强饲养管理,建立完善的生物安全体系 做好免疫接种, 增强机体特异

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