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 华中农业大学博士学位论文 宁夏地区食源性单核细胞增生性李斯特氏菌的安全性研究 STUDIES ON SAFETY OF FOODBORNE LISTERIA MONOCYTOGENES IN NINGXIA 博士研究生 : 乌日娜 学 号 ： 2011309010002 指导教师 : 陈福生教授 指导小组 : 陈福生教授 王小红教授 张秀艳副教授 邵彦春副教授 周有祥副研究员 吴仁蔚副教授 专业：食品科学 研究方向：食品安全 获得学位名称：工学博士 获得学位时间：2014年6月 华中农业大学食品科学与技术学院 二○一四年六月目录 目录 I 摘要 i Abstract iv Abbreviations viii 缩写词 viii 英文 viii 中文 viii 第一章 文献综述 1 1 单增李斯特菌概述 1 2单增李斯特菌的污染监测研究进展 2 3 单增李斯特菌的耐药性研究进展 3 4 单增李斯特菌的毒力基因检测研究进展 4 5 单增李斯特菌的分子分型研究进展 6 6 单增李斯特菌的检测技术研究综述 9 6.1 单增李斯特菌的分离培养方法 9 6.2 单增李斯特菌的PCR检测方法 9 6.3 环介导等温扩增技术研究进展 10 7 本研究的目的意义和内容 12 7.1 研究的目的和意义 12 7.2 主要研究内容 13 7.2.1宁夏地区食源性单增李斯特菌污染情况研究 13 7.2.2宁夏地区食源性单增李斯特菌耐药性分析研究 13 7.2.3宁夏地区食源性单增李斯特菌毒力基因检测研究 13 7.2.4 宁夏地区食源性单增李斯特菌分子分型研究 13 7.2.5双重环介导等温扩增法检测食品中单增李斯特菌的研究 13 7.3 技术路线 14 第二章 宁夏地区食源性单增李斯特菌污染状况分析研究 15 1 材料与方法 15 1.1 材料 15 1.1.1样品来源 15 1.1.2 主要试剂与培养基 16 1.2 方法 16 1.2.1 样品采集 16 1.2.2 LM分离鉴定方法 17 1.2.3 数据统计分析 18 2 结果与分析 18 2.1 2006年-2012年宁夏食品中LM污染监测分析 18 2.1.1 各类食品中LM的污染监测情况 18 2.1.2 不同年份食品中LM的污染监测情况 19 2.1.3 不同地区分离的LM的污染监测情况 21 2.2 银川市市售食品中LM的污染情况分析 22 2.2.1 各类食品中LM的污染情况 22 2.2.2 不同季度食品中LM的污染情况比较 23 2.2.3 不同贮藏温度食品中LM的检出情况 23 2.2.4 超市和农贸市场食品中LM的检出情况 24 2.3 2006年-2013年宁夏地区食源性LM的总体污染情况 24 3 小结与讨论 25 3.1 小结 25 3.1.1 2006年-2012年宁夏食品中LM污染监测结果 25 3.1.2 银川市市售食品中LM的污染调查结果 26 3.2 讨论 26 3.2.1 2006年-2012年宁夏食品中LM污染监测分析 26 3.2.2 银川市市售食品中LM的污染情况分析 27 第三章 宁夏地区食源性单增李斯特菌血清型和耐药性分析研究 29 1材料与方法 29 1.1 材料 29 1.1.1 试验菌株 29 1.1.2 主要试剂与培养基 30 1.1.3 主要仪器与设备 30 1.2 方法 30 1.2.1 PCR血清分型试验方法 30 1.2.2 传统血清分型试验方法 31 1.2.3 药敏试验方法 31 2 结果与分析 32 2.1宁夏地区食源性LM血清分型结果 32 2.1.1 各类食物中LM血清型分布情况 33 2.1.2 不同年份LM血清型分布情况 34 2.1.3 不同地区LM血清型分布情况 35 2.2 宁夏地区食源性LM药敏试验结果 35 2.2.1 宁夏地区食源性LM的耐药率与耐药型别 35 2.2.2 各类食物中LM的耐药情况 37 2.2.3 不同年份食源性LM的耐药情况 39 2.2.4不同地区LM的耐药情况 41 2.2.5 不同血清型LM的耐药情况 41 3 小结与讨论 42 3.1 小结 42 3.2 讨论 43 3.2.1 LM血清型结果分析 43 3.2.2 LM耐药结果分析 44 第四章 宁夏地区食源性单增李斯特菌毒力基因分布研究 47 1 材料与方法 47 1.1 材料 47 1.1.1 试验菌株 47 1.1.2主要试剂与培养基 48 1.2 试验方法 48 1.2.1 DNA的