瀘医免疫实验指导.doc

医学免疫学实验指导 供基础、预防、口腔、麻醉、药学、临床医学类专业用 泸州医学院 二零零六年六月 目录 机体的天然免疫…………………………………………………………………………………（） 实验一、溶菌酶的溶菌作用………………………………………………………………（） 实验二、中性粒细胞的吞噬作用…………………………………………………………（） 实验三、巨噬细胞的吞噬作用……………………………………………………………（） 凝集反应…………………………………………………………………………………………（） 实验四、直接凝集反应……………………………………………………………………（） 实验五、间接凝集反应……………………………………………………………………（） 沉淀反应…………………………………………………………………………………………（） 实验六、环状沉淀反应……………………………………………………………………（） 实验七、单向免疫扩散试验………………………………………………………………（） 实验八、双向免疫扩散试验………………………………………………………………（） 实验九、对流免疫电泳试验………………………………………………………………（） 实验十、火箭免疫电泳试验………………………………………………………………（） 实验十一、免疫电泳试验…………………………………………………………………（） 补体参与的反应…………………………………………………………………………………（） 实验十二、补体结合试验…………………………………………………………………（） 实验十三、总补体活性测定………………………………………………………………（） 实验十四、免疫荧光技术…………………………………………………………………（） 实验十五、流式细胞术……………………………………………………………………（） 实验十六、酶联免疫吸附试验……………………………………………………………（） 实验十七、放射免疫测定法………………………………………………………………（） 免疫细胞的检测…………………………………………………………………………………（） 实验十八、外周血单个核细胞的分离与纯化……………………………………………（） 实验十九、E玫瑰花结试验………………………………………………………………（） 实验二十、溶血空斑试验…………………………………………………………………（）atural immune of organism） 内容： 溶菌酶的溶菌作用 中性粒细胞的吞噬作用 巨噬细胞的吞噬作用 机体先天遗传形成的天然免疫力具有非特异性保护作用，主要由机体正常生理屏障、正常体液杀菌物质（如溶菌酶）、大小吞噬细胞与自然杀伤细胞（NK）等共同构成。 试验一、溶菌酶的溶菌作用 溶菌酶（lysozyme）主要由吞噬细胞合成并分泌的一种小分子蛋白质，属乙酰氨基多糖酶。它的等电点高（PH 11.0），能与细菌牢固的结合，并裂解肽聚糖中N-乙酰葡糖胺和N-乙酰胞壁酸之间的β-1，4糖苷键，使细菌溶解死亡。革兰氏阴性菌肽聚糖层少，又有外膜保护，故在一般情况下不受溶菌酶的影响。 溶菌酶广泛分布于机体的组织、体液与分泌液，其中泪液含量最高，约血清的100~150倍。临床慢性支气管炎，局部免疫功能降低，唾液中溶菌酶低于正常，各种类型的白血病患者血清和尿中溶菌酶含量有所增加。 【材料】 ⒈ 唾液、泪液（或乳汁）、标准溶菌酶（1ng/ml）、生理盐水、2~5%琼脂盐水。 ⒉ 细球菌（M.lysodeikticus）。 ⒊ 毛细吸管、打孔器（或滤纸片）、无菌平皿等。 【方法】 ⒈ 取一无菌平皿，倾入5ml细球菌悬液，再倾入5ml已溶化的2.5%琼脂盐水,迅速混匀,平放待凝。 ⒉ 用打孔器按图 所示打孔，挑去孔内琼脂，用毛细吸管分别加唾液、泪液（或乳汁）、标准的溶菌酶和生理盐水（或用无菌圆形滤纸片分别蘸取上述四种液体，按 图所示贴于平皿表面）。 ⒊ 37℃过夜，观察结果。 图 溶菌酶试验示意图 【结果】 孔周或滤纸片周围出现的透明圈即为溶菌环。注意比较溶菌环的大小。 【注意事项】 ⒈ 加样时，样品避免溢出孔外，孔内不应有气泡。 ⒉ 作定量检测时，先要用标准品制备标准曲线，然后根据环的直径及标准曲线求出样品含量。 ⒊ 标准曲线绘制后，每次检验样品时，最好在同一平皿上备有标准品的对照，以资比较。 【思考题】 溶菌酶的溶菌作用有什么生物学意义？ 【附录】 细菌悬液的配制：无菌吸取5ml PH6.4，1/15M PBS 加到细球菌培