炎寧片微生物限度检查方法验证.docVIP

贵州宏奇药业有限公司 炎宁片 微生物限度检查方法验证 验 证 人：顾荣跃 验证单位：贵州宏奇药业有限公司 验证日期：2014年10月 原始资料保存处：贵州宏奇药业有限公司 联 系 人：李天权 联系电话：0858-5315027转210 贵州宏奇药业有限公司 炎宁片微生物限度检查方法 【处方】鹿茸草3906g 白花蛇舌草1953g 鸭跖草1953g 【制法】 批号：140511 营养琼脂 批号：140211 营养肉汤 批号：140509 改良马丁 批号：131240 改良马丁琼脂 批号：140311 麦康凯琼脂（MacC） 批号：140206 （以上培养基均由上海博微生物科技有限公司提供） 四、菌种 枯草芽孢杆菌 (Bacillus subtilis) [CMCC(B)63501] 金黄色葡萄球菌 (Staphylococcus aureus) [CMCC(B) 26003] 大肠埃希菌（Escherichia coli）[CMCC(B) 44102] 白色念珠菌 (Candida albicans) [CMCC(F) 98001] 黑曲霉菌 (Aspergillus nier) [CMCC(F)98003] （以上菌种由贵州省药品检验所提供） 五、试验所用仪器37℃培养18~24小时的金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌的肉汤培养物1ml，用0.9%无菌氯化钠溶液10倍稀释至10-5 ~10-7，约为50～100cfu/ml的菌液,做活菌计数备用。 2、取经25~28℃ 培养18~24小时的白色念珠菌液体培养物1ml，用0.9%无菌氯化钠溶液10倍稀释至10-5 ~10-6，约为50~100cfu/ml的菌液，做活菌计数备用。 3、取经25℃ 培养1周的黑曲霉菌斜面培养物，加5ml 0.9%无菌氯化钠溶液洗下黑曲霉菌孢子，吸取出孢子悬液1ml，加0.9%无菌氯化钠溶液适量稀释，取1 ml稀释后的孢子悬液，用0.9%无菌氯化钠溶液10倍稀释至10-4，约为50~100cfu/ml的菌液，做活菌计数备用。 4、菌液的检验 4.1取上述金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌10-5 ~10-7稀释液1ml，用45℃营养琼脂培养基20ml注皿，各平行测定两皿，30～35℃培养48小时，计数，应约为50~100cfu/ml。 4. 2 取上述白色念珠菌10-5 ~10-6稀释液及上述黑曲霉菌菌10-4孢子悬液各1ml，用45℃玫瑰红钠琼脂培养基20ml注皿，各平行测定两皿，23～28℃培养,逐日观察计数，应约为50~100cfu/ml。 七、细菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证 检验依据：参照中国药典20版XIIIC） 1、供试液制备：取供试品24片置于灭菌过的研钵中研细，取细粉10g加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，充分混匀，作为1:10供试液。取1:10供试液4ml加入pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至10ml，充分混匀，作为1:25供试液。 2、回收率测定 2.1细菌回收率测定：（培养基稀释法） 2.11试验组：取1:25供试液1ml分别注入5个平皿中每皿0.2ml、同时注入50~100cfu细菌各1ml（平行操作两份），立即倾注营养琼脂培养基，待凝固后，置规定温度培养24~72小时逐日观察结果。 2.12菌液组：测定每一菌株所加的试验菌数（同菌液检验）。 2.13供试品对照组：取1:25供试液1ml注入5个平皿中每皿0.2ml（平行操作两份），立即倾注营养琼脂培养基，待凝固后，置规定温度培养24~72小时逐日观察结果，测定供试品本底菌数。 2.2霉菌及酵母菌回收率测定：（培养基稀释法） 2.21实验组：取1:10供试液1ml分别注入5个平皿中每皿0.2ml、同时注入50~100cfu霉菌各1ml（平行操作两份），立即倾注玫瑰红钠琼脂培养基，待凝固后，置规定温度培养24~72小时逐日观察结果。 2.22菌液组：测定每一菌株所加的试验菌数（同菌液检验）。 2.23供试品对照组：取1:10供试液1ml注入5个平皿中每皿0.2ml（平行操作两份），立即倾注玫瑰红钠琼脂培养基，待凝固后，置规定温度培养24~72小时逐日观察结果，测定供试品本底菌数。其结果