多糖分离纯化及含量测定.ppt

人有了知识，就会具备各种分析能力， 明辨是非的能力。 所以我们要勤恳读书，广泛阅读， 古人说“书中自有黄金屋。 ”通过阅读科技书籍，我们能丰富知识， 培养逻辑思维能力； 通过阅读文学作品，我们能提高文学鉴赏水平， 培养文学情趣； 通过阅读报刊，我们能增长见识，扩大自己的知识面。 有许多书籍还能培养我们的道德情操， 给我们巨大的精神力量， 鼓舞我们前进。 * 2. 色素的去除 中草药来源的多糖, 可能含有酚型化合物而颜色较深, 这类色素大多呈负性离子,不能用活性炭吸附剂脱色, 可以用弱碱性树脂DEAE-纤维素来吸附色素，这样不仅可以达到脱色的目的, 而且可以进行多糖的分离。 若多糖与色素结合, 易被DEAE 纤维素吸附, 不能被水洗脱, 这类色素可用低温氧化法脱色，温度较高下氧化易引起多糖的降解。 对于同时含有游离蛋白质和色素的多糖, 可通过生成金属络合物的方法以同时除去蛋白和色素, 方法是加入菲林试剂、氯化铜、氢氧化钡和醋酸铅等与多糖生成不溶性络合物, 经分离后用阴离子交换树脂分解络合物得到多糖。 3. 多糖的纯化 超滤法 季胺盐沉淀法 柱层析法 色谱法 其他方法 超滤法 膜分离技术（membrane separation technology，MST）是一种高效分离技术，分离过程以选择透过性膜作为分离介质，通过在膜两侧施加某种推动力（压力差、化学位差、电位差等），使原料液中组分有选择性的通过膜。目前应用较多的是超滤和微滤技术。如采用中空纤维超滤膜, 对多糖去蛋白质后的提取液通过超滤去除小分子杂质。 季胺盐沉淀法 季铵盐及其氢氧化物是一类乳化剂, 可与酸性糖形成不溶性沉淀, 常用于酸性多糖的分离。当溶液的pH 值增高或加入硼砂缓冲液使糖的酸度增高, 也会与中性多糖形成沉淀。 常用的季铵溴化物(CTAB) 及其氢氧化物(CTA-OH) 和十六烷基氯化吡啶 (CPC) , 其浓度一般为1% ~ 10% (W /V ), 它们可在酸性、中性、微碱性和碱性中分级沉淀分离出酸性多糖。 柱层析方法 纤维素柱层析 阴离子交换柱层析 凝胶柱层析 亲和层析 纤维素柱层析 柱中的载体是纤维素。先用乙醇液将柱内纤维素平衡好, 然后将多糖混合物全部沉淀于惰性的纤维素上面。用不同浓度乙醇水溶液(如80%, 60%, 40%, 20% ) 梯度洗脱, 则不同多糖就依次洗脱出来。先洗脱的是分子量最小的多糖, 最终洗脱的是分子量最大的多糖。在洗脱过程中, 由于各种多糖在柱上进行无数次的溶解和沉淀过程, 最终将各种多糖分离开来。 这种方法实质上与分步沉淀法相反, 可称其为分步溶解法。其理论塔板数较高, 所以流出液的纯度高。 但该法的缺点是流速慢, 纯化周期长, 特别是对于粘度较大的酸性多糖, 更显得流速过慢。 阴离子交换柱层析 至今应用最广泛的阴离子交换剂有二乙基氨基乙基纤维素(DEAE-cellulose) , DEAE-葡聚糖(DEAE-Sephadex) 及DEAE-琼脂糖(DEAE-Sepharose) 三种, 其中以DEAE-cellulose 应用得最广泛。DEAE-cellulose 具有开放性的骨架, 多糖能自由进入载体中并进行迅速扩散。它有较大的比表面积, 虽然其离子交换容量仅为0.70 ~ 0.75 mmol/g, 但其对多糖的吸附量较离子交换树脂大许多。 阴离子交换柱层析是目前多糖纯化中（也是柱层析中）应用最普遍的一种方法, 特别是对于体积较大的多糖溶液, 大多数首先采用阴离子交换柱层析。通过柱层析, 多糖溶液得到浓缩及初步纯化(有的多糖通过该步骤即可得到各种均一多糖组分)。 由于纤维素上的离子交换基团较少, 排列疏散且呈弱碱性, 所以对大分子的吸附较弱, 用一定离子浓度的盐就可将其洗脱下来。 阴离子交换柱层析适合于分离各种酸性、中性多糖及粘多糖。它的分离机理包括离子交换, 而更重要的是吸附与解吸附, 所以其不仅可应用于中性多糖与酸性多糖的分离, 也可应用于不同中性多糖的分离。 凝胶柱层析 根据多糖分子的大小和形状的不同即按分子筛的原理进行分离的。凝胶柱层析在多糖的分离纯化上应用得很普遍。通常在获得粗多糖后, 先用阴离子交换柱层析、透析、干燥, 溶解后再用凝胶柱层析。 凝胶柱层析是目前植物多糖最常用的高级纯化方法。 常用的凝胶有各种型号的交联葡聚糖凝胶(Sephadex)、琼脂糖凝胶(Sepharose) 和聚丙烯酰胺凝胶(Bio-gel)三大类，以及后来在这些凝胶上进行性能改良的新一代凝胶, 如Sephacryl、Superdex 和Superose 等。展开剂为各种浓度的盐溶液及缓冲溶液, 离子强度最好不低于0.2 mol/L (否则拖尾严重)。 亲和层析 某些特定多糖具