《叶绿素提取分离和理化性质.docVIP

华 南 师 范 大 学 实 验 报 告 学生姓名 何茂辉 学 号 20062501302 专 业 生物科学 年级、班级 06科三 课程名称 植物生理学实验 实验项目 实验类型 □验证 □设计 □综合 实验时间 08 年 11 月 11 日 实验指导老师 冷佳奕、黄胜琴 实验评分 叶绿素提取分离和理化性质 实验材料：大叶紫薇叶片 实验操作： 实验结果： 理化性质 现象 荧光现象 透射光一侧呈绿色 反射光一侧呈血红色 光破坏作用 黑暗处试管中溶液呈绿色 强光处试管中溶液呈褐绿色 铜代反应 试管中溶液颜色变化： 褐绿色→绿色 分析： 叶绿素在光照下可产生暗红色的荧光。 叶绿素的化学性质很不稳定，容易受强光的破坏， 特别是叶绿素与蛋白质分离后，破坏更快。 叶绿素中的镁可被H+取代而生成褐绿色的去镁叶绿素。 加入铜盐作用，去镁叶绿素则成为绿色的铜代叶绿素。 思考题： 为什么用80﹪有机溶剂提取叶绿素？ 由于植物叶子中含有水分，用纯丙酮提取，其提取液中丙酮最终浓度近似80﹪。 在提取叶绿素过程中加碳酸钙的作用？对量有何要求？ 加入碳酸钙只要是为了保护色素，防止在研磨的过程中被破坏。加入少许即可，若加入过多，会影响渗透压破坏叶绿素。 纸层析法分离叶绿素的原理？其中流动相和固定相分别是什么？ 利用混合物各组分在流动相和固定相两种不同溶剂中的分配系数差异，将它们分离。流动相是四氯化碳，固定相是滤纸上的水。 为什么绿色叶子中的叶绿素在光下不被破坏？ 因为绿色叶子中的叶绿素与蛋白质结合，所以不被破坏。 铜在叶绿素中取代镁的作用，有何使用意义？ 铜代叶绿素很稳定,在光下不易被破坏,故常用此法制做植物的原色标本 华 南 师 范 大 学 实 验 报 告 学生姓名 何茂辉 学 号 20062501302 专 业 生物科学 年级、班级 06科三 课程名称 植物生理学实验 实验项目 实验类型 □验证 □设计 □综合 实验时间 08 年 11 月 11 日 实验指导老师 冷佳奕、黄胜琴 实验评分 叶绿素含量的测定 实验材料：大叶紫薇叶片 实验操作： 实验结果： OD663 0.078 OD645 0.418 代入公式得出叶绿素浓度 Ca=12.7 OD663-2.69 OD645= -0.13382 mg/L Cb=22.9 OD645-4.68 OD663= 9.20716 mg/L CT=8.02 OD663+20.21 OD645= 9.07334 mg/L 代入公式得出叶绿素含量 叶绿素含量=C×25/100×1/w 物质 含量(mg/g) 叶绿素a -0.03346 叶绿素b 2.30179 叶绿素 2.268335 分析： 测定叶绿素含量的过程中造成的偶然误差过大，测得数值代入公式后得出负值，因此实验过程应尽量减少偶然误差，可做平行实验求平均值以减少误差。 思考题： 确定溶液测定光密度值时的波长依据？ 叶绿素a的最大吸收峰在663nm，叶绿素b的最大吸收峰在645nm，叶绿素a和b的吸收光谱曲线彼此有重叠。 如何计算叶绿素？表示单位？公式中k值与什么因素有关？ 根据Lambert-Beer定律，最大吸收光谱峰不同的两个组分的混合液，它们的浓度C与光密度OD之间有如下的关系： OD1=Ca·ka1+Cb·kb1 OD2=Ca·ka2+Cb·kb2 Ca 、Cb表示单位g/L, 公式中k值与组分、提取液、浓度有关。 要获得较准确叶绿素含量结果，在操作过程中注意哪些影响因素？ 要获得较准确叶绿素含量结果，应该注意提取过程时充分研磨和洗涤研钵时尽量洗涤充分，确保提取液中的叶绿素含量与叶片的叶绿素含量接近。 提出优化实验的想法。 由于本次实验是根据Lambert-Beer定律间接测定叶绿素的含量，因此实验中的偶然误差对实验结果有很大的影响，因此应从设置平衡实验着手。 华 南 师 范 大 学 实 验 报 告 学生姓名 何茂辉 学 号 20062501302