核酸的分离纯化及性质研究201603.docx

核酸的分离纯化及其性质研究 摘要：提取植物组织DNA和动物肝脏的DNA，先要研磨动植物组织得到研磨液，然后通过离心获得沉淀,分离出脱氧核糖蛋白（DNP）。利用阴离子除垢剂（SDS），将蛋白质和DNA分离开来，再用氯仿-异戊醇使蛋白质变性，然后离心除去变性蛋白质，之后用乙醇将DNA沉淀出来，得到粗DNA。为了获得高纯度的DNA，采用适量的RNase处理提取液来降解DNA中残留的RNA，再利用乙醇来提取DNA，重复多次来获得较纯的DNA。再利用DNA紫外吸收特性测定DNA的纯度，发现提取出来的DNA纯度还有待提高。利用二苯胺法测定DNA的含量，发现DNA含量偏低，DNA产率很低。最后采用琼脂糖凝胶电泳来分离DNA，测定DNA片段的分子质量，结果实验成功的在紫外线下观察出了标准DNA条带以及待测样品条带。 Abstract: In order to extract DNA from plant tissues and animal liver,we need break the cell to gain lapping liquid first,then separate the DNP by centrifuging.Use the SDS to break protein and DNA . Phenol-chloroform-isoamyl alcohol Mixture?can?make protein denaturation, then remove the denaturated　protein by centrifuging. Then,take the DNA dip into ethylalcohol, it?can?separate?the DNA.In?order?to?obtain?high?purity?DNA,?use?the?right?amount?of?RNase　 to disassemble residual RNA, ?recycled ?ethanol to extract DNA over and over again. Using?ultraviolet?absorption?characteristics?determine?the?purity?of?DNA?.we?found?that?the?purity?of?DNA?is?high. Diphenylamine is used?to?check?the?content?of?DNA,?the?discovery?of?DNA’scontent?is?low.　DNA’s yield is very low . Finally, agarose gel electrophores?is?used?to?separate?DNA?and?check?molecular?weight?of?DNA?fragments.Under?the?uv?light,we?found?standard?DNA?banding?and?the?banding?which?belong?to　pending text sample successfully. 关键词：核酸 分离 纯化 紫外吸收 二苯胺 琼脂糖凝胶电泳 前言：?核酸（nucleic?acid）是遗传信息的携带者，是基因表达的物质基础。核酸是由许多核苷酸?聚合成的生物大分子化合物，为生命的最基本物质之一。核酸广泛存在于所有动植物细胞?微生物体内，生物体内的核酸常与蛋白质结合形成核蛋白。无论是进行核酸结构，还是功能研究，首先需要对核酸进行分离和纯化。目前,人们已发现,除了遗传学上的用途外,核酸制剂还可广泛应用于医学、食品工业上，核酸及其衍生物具有有效的抗癌作用。所以核酸的分离纯化，一直广受大家的关注，本次试验就是以植物和动物作为实验材料，来进行核酸的分理纯化及性质研究。实验原理1，植物组织中DNA的分离和纯化原理DNA存在于细胞核中，天然状态的DNA绝大多数是以脱氧核糖核蛋白的形式存在，从细胞中提取DNA时，一般先获得脱氧核糖核蛋白（DNP），在将蛋白质除去。阴离子去垢剂SDS可使DNA与蛋白质分离，再用含少量异戊醇的氯仿去蛋白质，最后用乙醇把DNA从抽提液中沉淀出来。DNP与核糖核蛋白（RNP）在不同浓度的电解质溶液中溶解度差别很大，利用这一特性可将二者分离。以NACL为例：RNP在0.14mol/LNACL中溶解度很大，而DNP在其中的溶解度仅为纯水中的1%；当NACL浓度逐渐增大时，RNP的溶解度变化不大，而DNP的溶解度则随之增加；当NACL的浓度为1mol/L时，DNP的溶解度最大，为纯水中溶解度的2倍，因此通常可用1mol/LNACL提取DNA。进一步制备高纯度的