09.02.21高二生物《土壤中分解尿素的细菌的分离与记数2》（课件）(NXPowerLite).ppt

　　EMB培养基与大肠杆菌代谢产物产生紫色带金属光边的菌落 湖南长郡卫星远程学校 2009年上学期 制作 03 土壤中分解尿素的细菌的分离与记数2 　　在做本课题的实验时，A同学从对应106倍稀释的培养基中筛选出大约150个菌落。但是，其它同学在同样的稀释度下只选择出大约50个菌落。 　　其他同学认为A同学的结果有问题。他们分析可能是A同学的培养基被杂菌污染了，或者培养基中混入了其他含氮物质，因而导致不能分解尿素的细菌也能在该培养基上生长。 实例2 　　但是，A同学确信自己的实验操作准确无误，与其他同学的结果之所以不相同，是因为自己所选用的土壤样品不同。但是，A同学在设计实验的时候并没有设置对照，因而此时也拿不出令同学们信服的证据。 　　你能通过设置对照，帮助A同学排除上述两个可能影响实验结果的因素吗？ 　　一是由于土样不同，二是由于培养基污染或操作失误。究竟是哪个原因，可以通过实验来证明。 一种方案：可以由其他同学用与A同学一样的土样进行实验，如果结果与A同学一致，则证明A无误；如果结果不同，则证明A同学存在操作失误或培养基的配制有问题。 另一种方案： 将A同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养，作为空白对照，以证明培养基是否受到污染。 通过这个事例可以看出，实验结果要有说服力，对照的设置是必不可少的。 实验设计 土壤中分解尿素的细菌的分离与记数 一、基本思路 明确实验目的 弄清实验原理 确立实验条件 考虑材料用具可能的作用 设计实验方案 播放视频“土壤中分解尿素的细菌的分离与记数” 土壤中某样品细菌的分离与计数 　从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土3cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的信封中。 二、实验步骤 1．土壤取样 每个稀释度下需要3个选择培养基，1个牛肉膏蛋白胨培养基。还有两个空白对照，即不涂布稀释后菌液的选择培养基和牛肉膏蛋白胨培养基，准备好无菌试管和移液管。　　 实验步骤 2.制备培养基 设计原则 1、设立重复组，（至少涂布三个平板） 2、对照原则 a、判断培养基中是否有杂菌污染，需将未接种的培养基同时进行培养 b、判断选择培养基是否有选择作用，需设立牛肉膏蛋白胨培养基接种后培养 将10g土样加入盛有90mL无菌生理盐水的锥形瓶中,充分摇匀，吸取上清液1mL，转移至盛有9mL水的无菌试管中，依次等比稀释至107稀释度，并按照由107至103稀释度的顺序分别吸取0.1mL进行平板涂布操作。按照浓度从低到高的顺序涂布平板，不必更换移液管。　 实验步骤 3、样品的稀释与涂布平板 　　为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释度？测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量，选用的稀释范围相同吗？ 选用稀释倍数为103~107的稀释液， 　　 因为土壤中各类微生物的数量(单位：株/kg)是不同的，例如在干旱土壤中的上层样本中：好氧及兼性厌氧细菌数约为2 185万，放线菌数约为477万，霉菌数约为23.1万。因此，为获得不同类型的微生物，就需要按不同的稀释度进行分离，同时还应当有针对性地提供选择培养的条件。 　　测定土壤中细菌的数量，一般选用104、105和106倍的稀释液进行平板培养；测定放线菌的数量，一般选用103、104和105倍稀释液；测定真菌的数量，一般选用102、103和104倍稀释液。 注： 样品的稀释 实验步骤 4.微生物的培养与观察 　　将涂布好的培养皿放在30℃下培养。比较牛肉膏培养基和选择培养基中菌落的数量、形态等，并做好记录。 　　 　　不同种类的微生物，往往需要不同的培养温度和培养时间。细菌一般在30~37℃的温度下培养1~2d；放线菌一般在25~28℃的温度下培养5~7d；而霉菌一般在25~28℃的温度下培养3~4d。 注： 　　一般来说，在一定的培养条件下(相同的培养基、温度及培养时间)，同种微生物表现出稳定的菌落特征。 当菌落数目稳定时，选取菌落数在30~300的平板进行计数。在同一稀释度下，至少对3个平板进行重复计数，然后求出平均值，并根据平板所对应的稀释度计算出样品中细菌的数目。　 实验步骤 5.细菌的计数 每克土壤样品菌数 = 某稀释倍数的菌落平均数×稀释倍数÷细菌培养时所用的稀释液体积 [一]无菌操作 　　1.取土用的小铁铲的盛土样的信封在使用前都需要灭菌。 　　2.应在火焰旁称取土壤。在火焰附近将称好的土样倒入锥形瓶中，塞好棉塞。 　　3.在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁操作。 三、操作提示 [二]做好标记 　　注明培养基种类、培养日期、平板培养样品的稀释度等。 [三]规划时间 四、结果