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《薄层层析常用显色剂配制及显色方法
碘: 适用于不饱和或者芳香族化合物 配制方法:在100ml广口瓶中,放入一张滤纸,少许碘粒。 或者在瓶中,加入10g碘粒,30g硅胶高锰酸钾适用于含还原性基团化合物,比如羟基,氨基,醛 配制方法 :1.5g KMnO4 + 10g K2CO3 + 1.25mL 10% NaOH + 200mL 水. 使用期3个月磷钼酸(PMA)广谱 配制方法 :10 g of 磷钼酸+100 mL 乙醇紫外灯 适用于含共轭基团的化合物,芳香化合物硫酸铈生物碱 配制方法:10%硫酸铈(IV)+15%硫酸的水溶液氯化铁 苯酚类化合物 配制方法:1% FeCl3 + 50% 乙醇水溶液.桑色素(羟基黄酮) 广谱, 有荧光活性 配制方法:0.1% 桑色素+甲醇茚三酮 适用于氨基酸 配制方法:1.5g 茚三酮 + 100mL of 正丁醇+ 3.0mL 醋酸二硝基苯肼(DNP) 适用于醛和酮 配制方法:12g二硝基苯肼+ 60mL 浓硫酸 + 80mL 水 + 200mL 乙醇香草醛(香兰素) 广谱 配制方法:15g 香草醛 + 250mL 乙醇 +2.5mL 浓硫酸溴甲酚绿适用于羧酸,pKa=5.0 配制方法 :在100ml乙醇中,加入0.04g溴甲酚绿,缓慢滴加0.1M的NaOH水溶液,刚好出现蓝色即至。钼酸铈广谱配制方法:235 mL 水 + 12 g 钼酸氨 + 0.5 g 钼酸铈氨 + 15 mL 浓硫酸茴香醛(对甲氧基苯甲醛)1 广谱 配制方法:135 乙醇 + 5 mL 浓硫酸 + 1.5 mL of 冰醋酸 + 3.7 mL 茴香醛,剧烈搅拌,使混合均匀.茴香醛(对甲氧基苯甲醛)2 适用于萜烯,桉树脑(cineoles), withanolides, 出油柑碱(acronycine) 配制方法:茴香醛:HClO4:丙酮:水 (1:10:20:80)胺类物质常用的是:(1)磷钼酸显色剂:磷钼酸 5%-10% 乙醇溶液,淡黄色,久置变为浅绿色,不影响使用。浸板或喷板,加热,浅黄色背景,还原性物质显蓝绿色斑点,如果斑点太浓,可能显深黄色。(2)CAM显色剂:钼酸铵9.6g,硫酸铈0.4g,10%硫酸水溶液 200ml,混匀,极淡的黄色溶液,棕色瓶密闭保存,喷板,加热,白色背景,还原性物质显深蓝色斑点。
显色的方法各种各样,主要根据化合物的性质选择不同的显色方法。许多关于植物有效成分提取与分离的书上都有介绍,通用的有碘、硫酸乙醇、香草醛-硫酸等,当然还有许多专用的显色剂,如:溴甲酚绿使有机酸显黄色,三氯化铁使酚羟基显蓝色,碘化铋钾使生物碱显桔黄色.....
显色剂化合物苯胺邻苯二甲酸酯 碳水化合物,糖类溴甲酚绿羧酸二甲氨基苯甲醛 氨基酸,多肽磷钼酸苯酚类若丹明 类酯类
薄层层析常用显色剂配制及显色方法
附录
附录1 薄层层析及纸层析常用显色剂配制及显色方法
通用试剂(1)?重络酸钾-硫酸:检查一般有机物.喷洒剂:5克重络酸钾溶于100毫升40%硫酸中.薄层检查:喷洒后加热到150至班点出现(2)?荧光素-溴:检查不饱和化合物喷洒剂:0.1克荧光素溶于100毫升乙醇中溴试剂:5%的溴的四氯化碳溶液喷洒后处理:喷洒荧光素溶液后,放置存有溴溶液的缸内,可于紫外线分析灯下检查荧光,荧光素与溴化和成曙红(Eosin)(无萤光),而不饱和化合物则成溴加成物,保留了原有荧光;若点样较多,则呈黄色斑点,底板呈红色.(3)?碘:检查一般有机物.? 方法:a 层析谱放密闭缸内或瓷盘内,缸内预先放有碘结晶少许,大部分有机化合物呈棕色斑点。B 层析谱放碘蒸气中5分钟(或喷5%碘的氯仿溶液)取出置空气中待过量的碘蒸气全部挥发后,喷1%淀粉的水溶液,斑点转成蓝色。(4)硫酸:通用喷洒剂:5%的浓硫酸乙醇溶液,或15%浓硫酸正丁醇溶液,或浓硫酸-醋酸(1:1)
喷洒后处理:空气中干燥15分钟,再热至110直至出现颜色或荧光。(5)硝酸银-氢氧化铵(Tollen-Zaffaroni)试剂:检查还原性物质。溶液I : 0.1%N硝酸银; 溶液II: 5N氢氧化铵喷洒剂: I和II以1:5混合(临用前混合)喷洒后处理: 105加热5~10分钟,至深黑色斑点出现.?(6)磷钼酸或磷钨酸,硅钨酸:检查还原性物质,类脂体,生物碱,甾体喷洒剂: 5~10%磷钼酸或磷钨酸或硅钨酸乙醇溶液喷洒后处理: 120加热至斑点出现.沉淀试剂: 1克硅钨酸溶于20毫升水中,加10%盐酸至强碱性.
生物碱? (7)硫酸??=硫酸:检查生物碱及含碘化合物? 喷洒剂: 0.1克硫酸?混悬于4毫升水中,加入1克三氯醋酸,加热至沸,逐滴加入浓
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