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第9章 酶促反应动力学 酶促反应动力学 研究各种因素对酶促反应速度的影响。 影响因素包括有 酶浓度、底物浓度、pH、温度、 抑制剂、激活剂等。 单底物、单产物反应 酶促反应速度用单位时间内底物的消耗量和产物的生成量来表示 反应速度取其初速度，即底物的消耗量很小（一般在5﹪以内）时的反应速度 一、底物浓度对反应速度的影响 　　矩形双曲线 （一）米－曼氏方程式 米氏方程推导如下 v= K3[ES] (1)式 由酶促反应的饱和现象 知Vmax= K3 [E]T [E]T=([ES]+[E]) (4)式 将(1)和(3)式代入(4)式整理得 关于米氏方程的讨论 (1)由米氏方程知，酶促反应初速度v与底物浓度[S]的关系曲线为直角双曲线，此双曲线的二个渐近线为v=Vmax和[S]= -Km (续) (2)当底物浓度较低时，（[S]Km）Km+[S]≈Km v=Vmax[S]/Km, 若酶的总浓度不变则进一步有v与[S]成正比，即一级反应。 2. 　Km可近似表示酶对底物的亲和力； 4. Vmax 定义：Vm是酶完全被底物饱和时的反应速度，与酶浓度成正比。 Vmax=0.5?mol/min, 1 ?g纯酶（Mr:92000) 求转换数 （三）Ｋm值与Ｖmax值的测定 双倒数作图法(double reciprocal plot)，又称为 林-贝氏(Lineweaver- Burk)作图法 　 　 Eadie-Hofstee作图法 Hanes-woolf作图法 二、酶浓度对反应速度的影响 当[S]＞＞[E]，反应速度与酶浓度成正比。 三、温度对反应速度的影响 双重影响 1.过酸、过碱使酶本身变性失活 2.pH改变能影响酶分子活性部位上有关基团的解离 3.pH能影响底物的解离状态 总之，以上2、3两点均可影响酶与底物间的诱导契合 五、激活剂对反应速度的影响 激活剂(activator) 　　能够提高酶活性的物质。 大多数是无机离子，包括金属阳离子和无机阴离子 ? 小分子有机物（还原剂、螯合剂） ? 蛋白酶（激活酶原） 六、抑制剂对反应速度的影响 酶的抑制剂(inhibitor) 凡能使酶的催化活性下降而不引起酶蛋白变性的物质统称为酶的抑制剂。 可逆抑制作用和不可逆抑制用的鉴别 (一) 不可逆性抑制作用 * 概念 抑制剂通常以共价键与酶活性中心的必需基团相结合，使酶失活，不能用透析、超滤等方法予以除去。 * 举例 有机磷化合物 ?? 羟基酶 　 　 （二） 可逆性抑制作用 * 概念 抑制剂以非共价键与酶或酶-底物复合物可逆性结合，使酶的活性降低或丧失；抑制剂可用透析、超滤等方法除去。 1. 竞争性抑制作用 定义 抑制剂与底物的结构相似，能与底物竞争酶的活性中心，从而阻碍酶底物复合物的形成，使酶的活性降低。 竞争性抑制 竞争性抑制作用 ：抑制剂和底物竞争与酶结合，当抑制剂与酶结合后，就妨碍了底物与酶的结合，减少了酶的作用机会，因而降低了酶的活力。这种作用称为竞争性抑制作用 ES复合物 竞争性抑制作用 ——米氏方程 设 2. 非竞争性抑制 　　抑制剂与酶活性中心外的必需基团结合，底物与抑制剂之间无竞争关系。　 非竞争性抑制 反竞争性抑制 一. 单项选择题 1. 下面是谁提出的米-曼氏方程式 A. 巴斯德 B. Thomas Cech C. Watsson D. Crick E. Leonor Michaelis和Maud L. Menten 2. 那一种情况可用增加[S]的方法减轻抑制程度 A. 不可逆抑制作用 B. 竞争性抑制作用 C. 非竞争性抑制作用 D. 反竞争性抑制作用 E. 无法确定 3. 酶的竞争性抑制剂可以使 A. Vmax减小，Km减小 B. Vmax增加，Km增加 C. Vmax不变，Km增加 D. Vmax不变，Km减小 E. Vmax 减小，Km，增加 4. 下列常见抑制剂中，哪个属于可逆抑制剂 A. 有机磷化合物 B. 有机汞化合物 C. 有机砷化合物 D. 氰化物 E. 磺胺类药物 5. 别构酶的V～[S]正协同效应的曲线是 A.Z B. S C. 倒L D. L E.无法确定 6. 假定Rs＝（酶与底物结合达90％饱和度时的底物浓度）/(酶与底物结合达10％饱和度时的底物浓度)，则正协同效应的别构酶 A. Rs81 B. Rs =81 C. Rs 81 D. Rs≥81 E. Rs≤81 7. 丙二酸对