分離科学---第七章制备色谱技术.ppt

* 常规柱色谱的操作 (1)装柱：干法和湿法； (2)上样：液体上样和拌样上样，样品带尽可能窄； (3)洗脱：始终保持洗脱剂液面高于柱床表面，可梯度洗脱； (4)流分收集：常采用固定体积收集法，结合TLC检验； (5)样品回收：减压蒸馏或重结晶 第七章 制备色谱技术 * 7.2.3 干柱柱色谱 干吸附剂，待分离样品配成浓溶液或吸附于少量填料上上样，洗脱液接近色谱柱底部时停止洗脱，挖出或切开色带。 第七章 制备色谱技术 时间短 节省试剂 玻璃柱 尼龙柱 * 7.2.4 减压柱色谱 减压促进溶剂流动。 第七章 制备色谱技术 * 与加压相比，变换溶剂更加方便； 吸附剂高度一般不超过5cm； 分离过程中，逐渐增加洗脱剂中高极性溶剂的比例，开始阶段增加幅度较小(1%,2%,3%)，随后幅度逐步增大(5%,10%,20%等)，通常收集20-25个流分即可将所有成分洗脱。 第七章 制备色谱技术 * 7.3 加压液相柱色谱技术 (1)快速色谱法：约0.2MPa； (2)低压液相色谱法：0.5MPa； (3)中压液相色谱法：0.5～2MPa； (4)高压液相色谱法：2MPa； 第七章 制备色谱技术 * 加压液相色谱制备分离方法的建立： (1)采用薄层色谱确定分离条件。 对于快速和低压色谱，常用薄层色谱选择分离条件。 硅胶薄层色谱确定正相色谱条件，反相硅胶薄层色谱确定反相色谱条件，一般选择Rf不大于0.3且具有较好分离效果的展开剂。 第七章 制备色谱技术 * (2)采用分析HPLC来确定分离条件。 对于中压和高压色谱则需要用分析HPLC条件进行选择。 优化条件时，寻求较小的容量因子(k’3)为原则，分离度需高于分析LC所需要的水平，满足制备型LC采用过载模式来提高效率。 第七章 制备色谱技术 * 进样量的影响 实验室规模的制备，轻微过载，优点： (1)便于回收高纯度目标成分，纯度99%； (2)纯品几乎完全回收，回收率95%； (3)分离程序简单，不需要为了得到纯品进一步分析所得到的组分。 第七章 制备色谱技术 过载：低浓度时，进样量增加使得容量因子改变超过10％ * 浓度过载和体积过载 第七章 制备色谱技术 K不变，线性 结果可预测 K变化，非线性 结果难预测 * 边缘切割与循环色谱分离 －－分离不佳时 第七章 制备色谱技术 密闭进样器是将流经检测器的柱流出液通过多通阀连至泵的入口； 交替柱循环装置是连接两根色谱柱，通过阀门将第二根色谱柱切割得到的样品再加到第一根色谱柱上循环分离。 * 中心切割 第七章 制备色谱技术 适当损失组分，但避免色谱峰两端微量组分的污染。 * 制备加压色谱设备要求 (1)泵：流量大，压力不需要太大； (2)进样器：大样品环六通阀，环管细而长而不是短而粗，样品溶液低浓度，大体积； (3)色谱柱：装填均匀常采用柱床压缩技术即径向压缩和轴向压缩； (4)检测器：不需要高灵敏； 第七章 制备色谱技术 * 快速色谱法 简单易行 第七章 制备色谱技术 * 低压和中压色谱法 第七章 制备色谱技术 * 制备HPLC 第七章 制备色谱技术 参数 内径/mm 长度/cm 填料粒径/?m 柱效 进样量/mg 分析型柱 4-5 25 3.5, 5 50000 1 半制备柱 8-10 25-50 5-10 15000 5-50 制备柱 20-25 25-50 5-20 低 大 大制备柱 25 25-50 10 更低 更大 * 生产级的HPLC (1)溶剂花费是最大成本，昂贵、毒性、难处理溶剂不使用； (2)填料易得，性能好，重现性好； (3)溶剂回收再用； (4)直径大于5cm的色谱柱需专门设计，保证床层稳定，避免高压破坏。 第七章 制备色谱技术 * 模拟移动床色谱(SMB) 通常的色谱存在下列问题： (1)不能连续操作； (2)溶剂和分离材料利用率低； (3)流出组分被高度稀释； SMB同样的分离材料，生产力增加60倍，溶剂消耗量减少80倍。 第七章 制备色谱技术 * 模拟移动床色谱原理： 第七章 制备色谱技术 * 模拟移动床色谱原理： 第七章 制备色谱技术 * 模拟移动床色谱原理： 第七章 制备色谱技术 * 制备气相色谱： 第七章 制备色谱技术 * 径向柱色谱： 第七章 制备色谱技术 * 在惰性流动相中加入对固定相吸附或者溶解能力比所有组份都强的物质为顶替剂（或者直接用顶替剂做流动相。 适合于制备纯物质或者浓缩分离某一组份，缺点是每经一次