莽山烙鐵头蛇初毒的的生物活性分析(定稿).docVIP

莽山烙铁头蛇粗毒的的生物学活性 刘宇, 聂东宋﹡， 吴喆，刘立超，朱政斌 (湖南理工学院化学化工系，中国 岳阳 414000) 摘要:　莽山烙铁头蛇是我国濒临灭绝的物种，对其毒素的深入研究可以发现新的生物活性分子和及其的作用机理，也为莽山烙铁头独特的分子进化机制提供理论依据。本文分析了莽山烙铁头蛇毒粗毒对小鼠的半致死量，并采用膜片钳全细胞记录技术,研究了莽山烙铁头蛇毒粗毒对大鼠背根神经节神经元河豚毒素不敏感(TTX-R)钠河豚毒素敏感低电压激活（LVA）电压依赖性钙离子通道高电压激活（HVA）钙离子通道钠钙离子通道河豚毒素不敏感(TTX-R)钠(TTX-S) 钠电流无明显影响; 100、1000mg/L 的莽山烙铁头蛇毒素对HVA型钙离子通道有抑制作用；1000mg/L 的莽山烙铁头蛇毒素对LVA型钙离子通道电流峰值的有抑制作用，本研究为莽山烙铁头蛇毒素功能的深入研究奠定了良好的基础。 关键词　莽山烙铁头蛇；粗毒；膜片钳全细胞记录；生物学活性。 Study on the biological activity of crude venom from the Ermia mangshanensis LIU Yu, NIE Dongsong﹡, WU Zhe, LIU Lichao,ZHU Zhengbin (Hunan Institute of Science and Technology; Chemistry and Chemical Engineering College, Yueyang, China, 414000) Abstract: Ermia mangshanensis snake is an endangered species, in-depth study on its toxins can not only discover new biologically active molecules and its mechanism, but also provide a theoretical basis for its unique mechanism of molecular evolution. In this study, the cell patch-clamp technique was uesed to study the crude venom on the effect of rat root ganglion neurons back TTX -R sodium channels、TTX - -type sodium channels、Calciumion channels HVA type and Calciumion channels LVA type. The Results showed that 10,100,1000 mg / L of venom significantly inhibited TTX-R sodium channel and the HVA-type calcium channel in a dose dependent manner; 1000mg / L of venom can inhibit the LVA type calcium channel current，while the TTX-S sodium channel type was not inhibited。 Keywords: Ermia mangshanensisvenom; whole-cell patch-clamp; biological activity 本研究受湖南省教育厅科研项目（NO.06C370）“湖南省高校科技创新团队支持计划资助” 莽山烙铁头蛇是是蝰科腹亚科烙铁头蛇属的一个新种Murakami对莽山烙铁头蛇毒素中的PLA2成分进行了部分研究[6～8]， 而对莽山烙铁头蛇毒毒液的生物学功能的研究尚未见报道。 本研究对莽山烙铁头蛇毒液的半致死量进行了初步研究，并采用膜片钳全细胞记录技术,研究了莽山烙铁头蛇毒粗毒对大鼠背根神经节神经元TTX-R钠离子通道、TTX-S型钠离子通道、HVA型钙离子通道和LVA型钙离子通道的作用。 1 材料与方法 1.1 湖南省宜章县境内莽山自然保护区陈远辉Sprague-Dawley(SD)大白鼠由本院动物房提供。 1.2 实验试剂与所需设备 细胞外液(mmol/L): TEA-Cl 160, HEPES 10, BaCl2 2, glucose 10,用KOH 和HCl调节pH到7.4；细胞内液(in mM): CsCl 120, Mg-ATP 5, Na2-GTP 0.4, EGTA 10, HEPES-CsOH 20, 用