菘藍叶片的离体培养.docVIP

植物组织培养实验论文 学 院： 农学院生技12-320126268 学生姓名： 康莎莎 指导老师： 倪苏 刘凡 完成日期： 2014年月日 菘蓝叶片的离体培养 学院：农学院 班级：生物技术2012-3 姓名：康莎莎 学号指导教师：倪苏 刘凡 摘要：本实验以菘蓝幼嫩叶片为外植体，为研究不同外源激素种类、组合及其不同浓度对菘蓝叶片丛生芽诱导的影响，通过对离体消毒的菘蓝叶片采用四种不同激素配比的培养基进行比较培养。结果表明，在MS培养基的基础上添加6-BA+NAA都能成功诱导出丛生芽；但当添加激素为2,4-D+KT的培养基中，2,4-D对菘蓝叶片的愈伤组织的形成具有 一定的抑制作用,并且对于丛生芽的形成也有较强的抑制作用。但是对于其最强抑制诱导丛生芽和愈伤组织的浓度还有待进一步试验。 关键词：菘蓝叶片；离体培养；激素配比；愈伤组织；芽 菘蓝(Isatis indigotica Fort．)为十字花科(Cruciferae)菘蓝属植物。以根入药，药材名板蓝根[1]。原产中国。主产河北省安国，江苏省如皋、南通[2]。其根(板蓝根)、叶(大青叶)均可药用。具有清热解毒、凉血的作用，对于医治发烧、发斑、风湿感冒、咽喉肿烂、肝炎、腮腺炎等多种疾病，均有较好的疗效[3]。以往对菘蓝的研究多集中于其根——板蓝根化学成分和药理作用[4-6]。但板蓝根作为一种用量极大且长期销售不衰的药材，市场需求特别大。迫切需要快速生成大量且无病毒植株来满足市场需求，因此人民逐步将植物组织培养这一新技术应用于菘蓝。有关菘蓝的植物组织培养，前人已经做了一些阶段性研究[7,8]。如余绍华用菘蓝嫩叶、叶柄和嫩茎的组织培养为外植体[3]，陈秋芳、孟玉玲等以叶片为外植体，陈薇等以下胚轴为外植体建立了菘蓝的快速繁殖体系[9-11]，张胜珍研究了菘蓝叶片原生质的游离、纯化[12]，张菊红等应用正交设计方法[13]，对愈伤组织的诱导和分化培养基进行了优化筛选。本实验，将对离体消毒的菘蓝叶片采用四种不同激素配比的培养基进行比较培养，观察不同激素配比对菘蓝叶片愈伤组织的形成和芽的分化的影响，对其诱导分化的速度和诱导率进行分析，从而为进一步优化现有对菘蓝的组织培养技术提供重要的参考依据；同时也为菘蓝 的优质育种、转基因及遗传研究等工作奠定基础。 材料与方法 1.1供试材料 菘蓝幼叶：由四川农业大学植物生理系提供。 1.2试验方法 1.2.1 培养基配制 培养基设计如下：所有MS培养基均附加5.0g/L、蔗糖30g/L、肌醇100mg/L，并调节至PH=5.8。每500ml培养基分装于16个瓶子中（一共有4组，即64瓶），配制并分装好的培养基必须在高压蒸汽灭菌锅中121℃高温 湿热灭菌20分钟后放置于常温下备用。培养基配方如表1。 编号 不同激素组合 1 　MS + 6-BA 2.0mg/L + NAA 0.1mg/L 2 　MS + 6-BA 2.0mg/L + NAA 0.5mg/L 3 　MS + 2,4-D 1.0mg/L + KT 0.5mg/L 4 MS + 2,4-D 2.0mg/L + KT 0.5mg/L　　　 ℃的条件下培养。 在10-20天后有愈伤组织出现，观察其各指标（见表2），并记录各数据。 2结果与分析 2.1不同浓度激素配比对菘蓝叶片离体培养丛生芽及愈伤组织的影响 编号 诱导数 污染数 污染率 不定芽数 不定芽诱导率 愈伤组织数 愈伤诱导率 1 43 8 18.60% 15 34.89% 48.84% 2 14 0 0 5 35.71% 7 50% 3 33 0 0 2 6.06% 32 96.97% 4 27 15 55.56% 0 0 12 44.44% 表2 通过记录不同培养机中菘蓝叶片的存活率以及死亡率原因，发现1号组和4号组都被污染了，而4号组污染率最高，并且几乎全为真菌感染，追溯其原因得知是第4组同学在接种菘蓝过程中，在材料处理步骤中未能按照实验要求准确完成，造成整个小组实验结果受到极大影响，