酶工程實验报告.docVIP

本科学生 实验报告 姓名： 学号： 学院： 专业、班级： 实验课程名称＿ 指导教师及职称 开课学期 至 学年 学期 云南师范大学教务处编印 实验序号及名称：实验二淀粉酶产生菌发酵条件的优化 实验时间： 实验地： 实验目的： 了解酶制剂生产过程中实验室发酵条件优化的基本方法。 实验原理： 微生物产酶受以下制约： 培养基成分 物理条件 为了得到最佳产酶量，必须对这些因素进行优化，并通过单因子分析找出最适合的发酵工艺条件。 碳、氮源是组成微生物细胞蛋白质、酶和核酸的主要元素之一，是影响微生物产酶的两个重要因素。 淀粉酶产生菌的发酵是好氧过程，因而发酵液中的溶氧浓度是发酵过程中的一个需要调节的重要参数。 接种量大小是决定菌体在发酵培养基中生长速度的一个重要因素，选择适当的接种量是必要的。 实验材料 试 剂 1、碳源：葡萄糖、麦芽糖、乳糖木薯淀粉、 可溶性淀粉。 2、氮源：蛋白胨、牛肉膏、 酵母粉、 NH4AC、 NH4NO3、( NH4)2SO4。 3、酶活测定试剂：同实验一 仪 器 300mL三角瓶、 移液管、大试管、培养皿、 pH试纸。 电子天平、超净工作台、培养箱、恒温调速摇瓶柜、离心机（离心管）、恒温水浴锅、分光光度计、比色皿、记时器、电冰箱。 培养基 1、种子培养基LB（100mL） 蛋白胨 1.0g 酵母粉 1.0g NaCl 0.5 g pH 5.5 2、发酵培养基 碳源 2.0% 氮源 1.0% KH2PO4 0.05% MgSO4 0.01% CaCl2 0.05% 碳源：淀粉,葡萄糖，马铃薯淀粉 氮源：蛋白胨，酵母粉，硝酸钠 装液量：30ml，40ml，50ml，60ml 接种量： 8%、10%、12%、14% 若碳源不变，则用淀粉 若氮源不变，则用蛋白胨 实验方法、步骤及注意事项： 菌种准备 菌种活化：试管保存菌种→LB平板→37℃培养48h 2、液体培养：将菌种接种入装有30mL 种子培养基的250mL三角瓶内，于37℃，200rpm，培养16h。 碳源对发酵产酶的影响 1、碳源种类对发酵产酶的影响 在30mL不含碳源的发酵培养基中加入2%的上述不同碳源，保持其它成分不变，在相同接种量（10%）相同培养条件下（37℃，72h 200rpm）摇瓶发酵，测定酶活力。 2、碳源浓度对发酵产酶的影响 ——单因子分析 选取其中效果最明显的一种作为碳源，分别以0.5%、1%、1.5%、2%、2.5%和3%的浓度添加到不含碳源的发酵培养基中，在相同接种量（10%）相同培养条件下（37℃，72h，200rpm）摇瓶发酵，测定酶活力。 氮源对发酵产酶的影响 1、氮源种类对发酵产酶的影响 在30 mL不含氮源发酵培养基中加入1.5%的上述不同氮源（无机和有机氮源），保持其它成分不变，在相同接种量、相同培养条件下（37℃，72h，200rpm）摇瓶发酵，测定酶活力。 2、氮源浓度对发酵产酶的影响 选取其中效果最明显的一种作为氮源，分别以0.5%、1%、1.5%、2%、2.5%和3%的浓度添加到不含碳源的发酵培养基中，在相同接种量、相同培养条件下摇瓶发酵72h ，测定酶活力。 装液量对产酶的影响。 在250 mL三角瓶中分别装20mL、30mL、40mL、50mL、60mL和70mL的培养基，在相同接种量（10%）相同培养条件下（37℃，72h，200rpm）摇瓶发酵，测定酶活力。 （五）接种量对产酶的影响 分别以8%、10%、12%、14%的接种量接种淀粉酶产生菌于30mL的发酵培养基中，在相同的培养条件下（37℃，72h，200rpm）摇瓶发酵，测定酶活力。 注意事项： 每个同学都参与实验 称量天平分开使用 称量器皿用后摖净后再使用，避免叉污染试剂。 使用前检查仪器设备是否完好，使用后及时清理干净。 五、实验结果及分析： 实验数据如下表： 碳源 葡萄糖 淀粉 马铃薯 试管号 A B A B A B OD54