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酶工程实验相关数据处理 实验一：酵母蔗糖酶的提取（12.11.13） 表1.DNS法测葡萄糖浓度 空白 标准葡萄糖浓度梯度 样品 管号 0 1 2 3 4 5 A B 葡萄糖标准液mg/ml 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 0 0 蔗糖溶液 1 1 1 1 1 1 1 1 醋酸buffer 1 1 1 1 1 1 1 1 待测酶液 0 0 0 0 0 0 50ul 50ul 37℃准确反应15min，1 ml 1 mol/L NaOH终止酶促反应 水杨酸试剂（DNS） 1ml 1ml 1ml 1ml 1ml 1ml 1ml 1ml 沸水浴精确反应5 min,冷却后定容至20 ml A540 0 0.100 0.205 0.300 0.375 0.478 0.474 0.412 由上图可得：葡萄糖标准曲线方程为y=0.4729x+0.0066 根据上表中测得的样品的吸光度可得到： 样品A：x=0.988 样品B：x=0.857 由此可得：酶含量平均值X=0.923 所以，粗提样品中酶含量为0.923mg 实验二：蔗糖酶酶学性质研究(2012.11.14) 表2.葡萄糖标准曲线绘制 空白 标准葡萄糖浓度梯度 管号 0 1 2 3 4 5 葡萄糖标准液mg/ml 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 蔗糖溶液（ml） 1 1 1 1 1 1 醋酸buffer（ml） 1 1 1 1 1 1 37℃准确反应15min，1 ml 1 mol/L NaOH终止酶促反应 水杨酸试剂（DNS） 1ml 1ml 1ml 1ml 1ml 1ml 沸水浴精确反应5 min,冷却后定容至20 ml A540 0 0.088 0.176 0.297 0.402 0.452 由图可知，葡萄糖标准曲线方程为：y=0.4747x-0.0015 最适pH的测定 待测组的加样量及加样顺序 表3.pH对酶活力的影响 管号 1 2 3 4 5 6 7 蔗糖溶液（ml） 1 1 1 1 1 1 1 不同pH缓冲液（ml） 1 1 1 1 1 1 1 体系pH 2.5 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 8.0 待测酶液 50ul 50ul 50ul 50ul 50ul 50ul 50ul 37℃准确反应15min，1 ml 1 mol/L NaOH终止酶促反应 水杨酸试剂（DNS） 1ml 1ml 1ml 1ml 1ml 1ml 1ml 沸水浴精确反应5 min,冷却后定容至20 ml A540 0.017 0.035 0.053 0.063 0.054 0.024 0.004 空白组的加样量及加样顺序 空白组的加样量与待测组的相同，不同之处在于空白组先各加1ml 1 mol/L NaOH，然后进行37℃水浴，其余顺序及时间均相同。空白组用于吸光度测定时与待测组各pH对应的参比。 由图可知，酵母酶