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全人源化单克隆抗体的专利分析 　　摘 要：单克隆抗体的发展依据其人源化程度不同走过了四个阶段，现今全人源化抗体成为研发热点。文章在德温特世界专利索引数据库及中国专利检索系统文摘数据库中检索了全人源化抗体的专利，并进行分析。分析结果表明，全人源抗体正处于起步阶段，总的申请量较小。在治疗用抗体中，以肿瘤治疗的抗体专利最多；国外主要申请人均为知名跨国药企；我国药企的申请量不少于高校及科研院所，其所申请的专利多用于肿瘤治疗，以抗CD20、VEGF、HER2抗体为主。 　　关键词：全人源抗体；单克隆抗体；专利分析；治疗抗体 　　1 背景 　　抗体作为介导体液免疫的重要效应分子，是B细胞接受抗原刺激后增值分化为浆细胞所产生的糖蛋白。由于其在疾病的诊断、免疫防治及基础研究中的重要作用，人工制备抗体技术必然被人们所关注。1975年，Kohler和Milstein建立了单克隆抗体（Monoclonal Antibody，mAb）制备技术，使得规模化制备高特异性、均质性抗体成为可能。此技术是将产生特异性抗体的小鼠B细胞与骨髓瘤细胞融合，形成杂交瘤细胞（Hybridoma），它既有骨髓瘤细胞大量扩增和永生的特性，又具备免疫B细胞合成和分泌特异性抗体的能力。由于来源于一个B细胞，故经筛选克隆得到的杂交瘤细胞仅产生抗单一抗原表位的特异性抗体，称为单克隆抗体[1]。 　　由于单克隆抗体具有结构均一、纯度高、特异性强、效价高、血清交叉反应少、制备成本低等优点，其在多种疾病诊断、治疗及预防中有着广泛的应用。近年来，作为疾病治疗药物的单抗研发也成为一个热点，尤其是在抗肿瘤治疗方面。1997年，美国FDA批准利妥昔单抗用于某些CD20阳性的B细胞性非霍奇金淋巴瘤的治疗，使该药成为首个被批准用于恶性肿瘤的单克隆抗体[2]。随后越来越多的单抗被批准用于恶性肿瘤的治疗，至2014年，已上市的抗肿瘤抗体药物共20种，如西妥昔单抗可用于头颈部肿瘤、结肠癌的治疗，曲妥珠单抗用于乳腺癌、胃食道癌的治疗，阿仑单抗用于治疗慢性淋巴细胞性白血病，贝伐单抗可用于非小细胞肺癌、肾细胞癌、胶质母细胞瘤等的治疗[3]。 　　虽然单克隆抗体具有多种优点，但由于是以小鼠为细胞来源，其产生抗体的鼠源性对人具有较强的免疫原性，可使人体产生人抗鼠的免疫应答，从而会削弱单抗的治疗作用，甚至导致机体的免疫病例损伤。于是，单抗的人源化成为研究趋势。在经过三十多年的发展中，以单抗的人源化程度区分，至今已经过四个阶段的发展，分别为：（1）鼠源性单抗。即上文所述使用小鼠的B细胞与骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞，生产单抗。（2）嵌合抗体。此种抗体是将杂交瘤细胞中的功能性可变区基因提取出来，将其与人体Ig恒定区的基因相连接，再引入合适的表达载体，通过转染宿主细胞来表达人-鼠嵌合抗体，其人源化程度可达70%。（3）人源化抗体。此种抗体进一步提高了单抗的人源化水平，可通过重构抗体及表面重塑技术实现。重构抗体或称改形抗体，是将鼠单抗可变区中互补决定区（CDR）序列取代人源抗体相应CDR序列，最高可实现人源化90%以上；表面重塑技术或称镶面抗体，是将鼠单抗可变区表面暴露的骨架区氨基酸残基进行人源化改造[4， 5]。（4）全人源化抗体。此种抗体也称人源性抗体或全人抗体，是当前单抗技术研发的趋势所在，也是文章讨论的重点。全人源抗体可通过噬菌体抗体库技术、转基因小鼠制备人源性抗体、核糖体展示技术、EBV转化B细胞克隆技术、单个B细胞克隆等技术来实现。 　　专利文献作为衡量行业技术创新的重要指标，可以反映出一个行业研发的热度和重点。专利分析是专利战略研究的核心，其本质是对专利说明书、专利公报中大量零碎的专利信息进行分析、加工、组合，并利用统计学方法和技巧使这些信息转化为具有总揽全局及预测功能的竞争情报，从而为企业的技术、产品及服务开发中的决策提供参考。作为在医疗和基础研究领域均具有重要作用的单克隆抗体技术而言，其研发的热度可以从专利申请量上反应出来。自该技术诞生后，单克隆抗体相关专利的世界申请总量稳步攀升，至2000年前后达到一个顶峰[6]；而我国的相关专利申请量则是在上世纪九十年代开始有稳步的增长，并在近十年一直维持较高的申请量[7]。而自美国Scripps研究所Lerner实验室在1989年首次应用噬菌体表面展示技术构建了噬菌体抗体库，并以此技术获得了全人源化抗体以来，相关技术也得到了稳定的发展。文章将对1990年之后的相关国内外专利进行分析，以此获得此新技术的发展趋势等信息，并对我国企业及研发机构的发展方向给出建议。 　　2 全人源抗体的专利概况 　　作者使用德温特公司（Derwent）世界专利索引数据库（WPI）（更新于2015年4月30日）与中国专利检索系统文摘数据库（CPRSABS）（更新于20