金桔組织培养及其形态发生与生理生化变化.doc

分类号 密级 U D C 编号 学 位 论 文 金桔组织培养及其形态发生与生理生化变化 Tissue culture of Fortunella margarita（Lour.）Swingle and it’s morphological and physiol-biochemical changes 曾 明 指导教师姓名： 杨柏云 教授 南昌大学生命科学学院 申请学位级别： 硕 士 专业名称： 植 物 学 论文提交日期： 2005年5月 论文答辩日期：2005年6月 学位授予单位和日期： 南昌大学 2005年6月 答辩委员会主席： 评阅人： 2005年5月　日目 录 摘 要 IV Abstract V 引 言 1 文献综述 2 1 植物组织培养概述 2 2 组织培养在柑桔研究中的应用 2 2.1 遗传育种 3 2.1.1 杂种育种 3 2.1.2 单倍体育种 3 2.1.3 三倍体育种（无核育种） 4 2.1.4 抗性育种 4 2.2 无病毒苗培养 5 2.3 离体种质保存 6 2.4 组织形态学研究 7 2.5 生理生化研究 7 2.6 柑桔基因工程 8 3 问题与展望 9 4 本研究的意义 9 材料与方法 11 1 材料 11 2 方法 11 2.1 金桔上胚轴离体培养再生体系的建立 11 2.1.1 愈伤组织的诱导 11 2.1.2 愈伤组织的分化 12 2.1.3 生根培养 12 2.2 离体培养过程中解剖学观察 13 2.2.1 愈伤组织诱导过程的解剖学观察 13 2.2.2 愈伤组织分化过程的解剖学观察 13 2.3 离体培养过程中同工酶变化 13 2.3.1 酶样的制备 13 2.3.2. 电泳贮液配制 14 2.3.3 电泳 14 2.4 可溶性蛋白含量变化的测定 16 2.4.1. 愈伤组织诱导阶段取样 16 2.4.2 愈伤组织分化阶段取样 16 2.4.3 蛋白质含量测定 16 结果与分析 17 1 金桔上胚轴离体培养体系的建立 17 1.1 愈伤组织的诱导 17 1.2 愈伤组织的分化 18 1.3根的诱导 19 2 离体培养过程中的解剖学观察 20 2.1上胚轴的解剖学观察 20 2.2 愈伤组织诱导过程中的解剖学观察 20 2.3 愈伤组织分化过程中的解剖学观察 20 3 离体培养过程中几种同工酶的变化 21 3.1. 过氧化物酶（POD）的变化 21 3.2 超氧化物歧化酶（SOD）的变化 22 3.3 过氧化氢酶（CAT）的变化 22 3.4 苹果酸脱氢酶（MDH）的变化 23 4上胚轴离体培养过程中可溶性蛋白含量的变化 24 4.1 愈伤组织诱导阶段可溶性蛋白含量变化 24 4.2 愈伤组织分化阶段可溶性蛋白含量变化 24 讨 论 25 1 愈伤组织的诱导与分化 25 1.1 外植体因素 25 1.2 激素对愈伤组织诱导的影响 26 1.3 激素对愈伤组织分化的影响 26 2 生根培养 27 3 离体培养中解剖学化特点 27 4 同工酶变化与愈伤组织诱导和分化的关系 28 5 可溶性蛋白含量变化与愈伤组织诱导和分化的关系 29 结 论 31 参考文献 32 附图 36 致 谢 38 摘 要 本研究以金桔上胚轴为离体培养材料，研究了愈伤组织诱导和器官发生的适宜条件，建立离体培养再生体系。通过石蜡切片观察了离体培养过程中外植体形态发生的变化过程；用紫外分光光度法和聚丙烯酰胺凝胶电泳分别研究了离体培养过程中可溶性蛋白含量和几种同工酶的变化。实验结果表明：6-BA和NAA适当浓度配比对离体诱导和分化有促进作用，愈伤组织诱导以6-BA 1.5mg/L + NAA 1.0mg/L为佳，第24d愈伤组织增长20.3倍。愈伤组织分化以6-BA 1.5mg/L + NAA 0.5mg/L为佳，分化率为75%。生根培养时，较高的NAA浓度（1mg/L）易产生愈伤组织，较低浓度无机盐有利于生根，以1/2 MS + NAA 0.5mg/L较好。金桔上胚轴离体再生为器官发