銀屑病患者外周血单一核细胞CD44及CD54分子的表达x.docxVIP

银屑病患者外周血单一核细胞CD44及CD54分子的表达银屑病患者外周血单一核细胞CD44及CD54分子的表达中华皮肤科杂志 1998年第2期第31卷 论著摘要作者：李冠勇　刘华昌　周春蕾　曹瑞华　尹格平单位：250031 济南，济南军区总医院皮肤科(李冠勇　刘华昌　周春蕾　曹瑞华)；流式细胞研究室(尹格平)我们采用流式细胞仪对银屑病患者外周血单一核细胞(PBMC)CD44及CD54分子的表达进行了初步研究，旨在探讨PBMC CD44及CD54分子在银屑病发病中的作用。一、资料和方法1.观察对象：46例寻常型银屑病患者，男26例，女20例；年龄17～63岁，平均35岁；病程半个月至35年；其中进行期附表　银屑病患者外周血单一核细胞CD44及CD54表达(±s，%)　组　别例数CD44+CD54+±st值*±st值*正常人对照组银屑病组404613.42±3.4130.61±5.3517.994.75±1.026.27±1.745.017　进行期静止期252135.16±4.1326.06±4.726.9737.16±1.215.38±1.174.684　治疗前治疗后252533.24±4.8320.05±5.049.4486.98±1.544.96±1.724.375*两者比较的t值，P均＜0.0125例，静止期21例。健康对照者40例，男21例，女19例；年龄18～60岁，平均34岁。两组均排除系统性疾患。抽血前2个月内均无应用皮质类固醇、免疫抑制剂及细胞毒性药物史。2.实验方法：(1)单克隆抗体和对照：异硫氰酸荧光素(FITC)标记鼠抗人CD44及CD54单克隆抗体，阴性对照为FITC标记羊抗鼠IgG１多克隆抗体。由法国国际免疫公司生产。(2)流式细胞仪：FACScan型，美国Becton-Dickinson公司产。(3)PBMC悬液：取静脉血2ml，2% EDTA抗凝(EDTA∶血=1∶9)，叠加于2ml Ficoll-Hypaque分离液上，离心1500r/min，15分钟，提取单一核细胞层，再以PBS 2ml漂洗，同速离心(细胞浓度10６/ml)，去上清后以70%乙醇固定，4℃保存备用。(4)免疫荧光染色：反应前以PBS漂洗离心1次以除去固定剂，将PBMC悬液分为4管，每试管500μl，分别加入FITC标记鼠抗人CD44单克隆抗体、FITC标记羊抗鼠IgG１多克隆抗体、FITC标记鼠抗人CD54单克隆抗体及FITC标记羊抗鼠IgG１多克隆抗体20μl。室温下反应20分钟，以PBS漂洗离心2次，弃上清液。(5)流式细胞计数：上机前以标准荧光微球调整仪器，使变异系数稳定在2%左右，上机后计数2×10４个细胞，荧光强度以对数放大，光散射数据存软盘，测试完后在Macintosh650计算机上用Cell Qutst Plot软件(美国Becton-Dickinson公司产)分析数据。3.统计学处理：结果中所列数据以±s表示，对方差齐者采用t检验，不齐者采用t′检验。二、结果1.银屑病患者PBMC中CD44阳性率较对照组显著增高(P＜0.01)；进行期患者PBMC中CD44阳性率明显高于静止期患者(P＜0.01)。2.银屑病患者PBMC中CD54阳性率较对照组显著增高(P＜0.01)；进行期患者CD54阳性细胞百分率明显高于静止期患者(P＜0.01)，详见附表。3.经过皮质类固醇激素、活血化瘀中药、紫外线(UV-N)照射等治疗，25例患者皮疹消退，其CD44及CD54阳性细胞百分率较治疗前显著降低(P＜0.01)。4.将患者按病程分为3组(＜5年、5～15年、＞15年)，结果显示PBMC中CD44及CD54阳性率与病程长短无关(P均＞0.05)。三、讨论CD44分子是细胞表面的整合膜蛋白，属粘附分子家族。CD44分子有几种类型，在原始的造血细胞上表达的CD44类型称CD44标准型(CD44std)［1］。已有研究表明淋巴细胞CD44std在淋巴细胞与内皮细胞(EC)粘附［2］、淋巴细胞移行、淋巴细胞生成、淋巴细胞归巢、T细胞活化［3］及释放细胞因子［1］方面具重要作用。CD44std还是透明质酸的受体［1］。业已证明透明质酸在炎性反应、血管生成等方面亦具重要作用［4］。我们的结果显示银屑病患者PBMC中CD44阳性率显著增高，且与病情有关，提示PBMC CD44分子异常可能与银屑病患者淋巴细胞浸润、细胞因子异常、血管发生(angiogenesis)等有关。CD54由90　000～114　000单链糖蛋白组成，属免疫球蛋白基因超家族成员。CD54为淋巴细胞功能相关抗原-1(lymphocyte funtion-associated antigen-1, LFA-1)的配基［5］。CD54分子与白细胞通过EC到达炎性部位有关［5］。正