FISH技术在血液肿瘤中的应用__培训课件.pptx

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FISH技术在血液肿瘤中的应用探针DNA加入荧光标记解螺旋,杂交荧光原位杂交Fluorescence In Situ Hybridization, FISHFISH-目前新兴的分子遗传学技术,原理是采用荧光标记的DNA探针,利用探针与检测样本中DNA碱基对的互补性,在探针与标本的DNA杂交后,通过荧光显微镜检测荧光信号而得出结果,从而检测细胞、组织样本中的染色体和基因异常。样本预处理探针、样本变性探针+样本杂交杂交后洗涤结果观察FISH基本实验过程FISH探针种类根据标记颜色的不同,常用探针主要有:单色探针(single color probe, SC)双色探针(dual color probe, DC)三色探针(triple color probe, TC)双色分离探针( dual color, break apart probe, DC, BCR)双色单融合探针( dual color, single fusion probe, DC, SF Trans)额外信号探针(extra signal, ES)双色双融合探针( dual color, dual fusion probe, DC, DF Trans)单色探针(SC):双色探针(DC):三色探针( TC):正常异常正常异常D7S486CEP7正常异常CEP18XYFISH技术的应用FISH检测在临床上主要应用于:血液系统疾病:白血病、MDS、MM等;实体瘤:乳腺癌、膀胱癌等;产前遗传筛查:唐氏综合症(21三体)等临床意义:从遗传学角度检测染色体和基因的异常辅助诊断,判断预后,疗效检测及微小残留检测FISH技术在血液肿瘤中的应用 血液系统肿瘤是我国十大高发肿瘤之一。大量研究表明,不同类型的血液肿瘤往往有其特异的染色体异常,对肿瘤分型、诊断、治疗和预测用预后都具有重要意义。常规细胞遗传学分析(CC)方法只能分析中期染色体,而对间期细胞、复杂核型细胞和染色体微缺失无法进行诊断。FISH技术弥补了CC在这方面的不足,因此被广泛应用于血液肿瘤的研究、诊断等方面。白血病的细胞遗传学异常FAB分型细胞遗传学异常分子异常M0核型异常常见且复杂,常累及5、7、8和13染色体M1t(9;22), inv(3)M2t(8;21), t(6;9),t(12p)AML1-ETOM3t(15;17)PML-RARAM4+4, 11q23重排, M4Eo inv(16)/t(16;16)MLL-AF9M5t(11q), t(8;16)Pre-B/B-ALL(L1/L2)t(9;22)(q34;q11)BCR-ABLB-ALL(L3)t(8;14)(q24;q32)MYC-IGH……血液肿瘤的FISH检测临床上对血液肿瘤的FISH检测主要集中在以下几个方面:染色体易位形成的融合基因检测:如CML的BCR-ABL、M3的PML-RARA、M2b的AML1-ETO融合基因等;基因缺失检测:如CLL的P53基因缺失提示患者预后很差,而13q单一缺失则提示预后较好;对异性间造血干细胞移植的植入状态检测:通过性染色体计数探针动态监测供/受者混合性嵌合体比例变化对异性间异基因造血干细胞移植后植入状态进行监测;微小残留病灶(MRD)的检测:通过对肿瘤细胞特异的染色体异常进行跟踪监测,预测疾病进展和有无复发迹象。血液肿瘤荧光原位杂交探针疾病名称探针名称浆细胞疾病多发性骨髓瘤(MM)GLP P53,GLP RB1 ,GLP D13S319 GLP IGH ,GLP 1q21白血病慢性淋巴细胞白血病(CLL)GLP P53 GLP RB1 GLP D13S25 GLP ATM CSP 12 慢性粒细胞白血病(CML)GLP BCR/GLP ABL;GLP ASS急性早幼粒细胞白血病(AML-M3)GLP PML/GLP RARA 急性原始粒细胞白血病部分分化型(AML-M2)GLP AML1/GLP ETO粒-单核细胞白血病 (AML-M4)GLP CBFB小儿急性淋巴细胞白血病(ALL)GLP 4/10,GLP 17, GLP BCR/GLP ABL,GLP MLL GLP TEL/AML1MDS骨髓增生异常综合症GLP CSF1R/ GLP D5S23,D5S721GLP EGR1/ GLP D5S23,D5S721GLP D7S486/CSP7;GLP D7S522/CSP7;GLP D20

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