各种染色方法及应用__培训课件.ppt

* 流式细胞术 * 　　流式细胞术（FLOW CYTOMETRY）是利用流式细胞仪检测细胞或其它颗粒性物质的物理、化学特性。它借鉴了荧光显微镜技术与血球计数原理,同时利用荧光染料,激光技术,单抗技术以及计算机技术的发展,大大提高了检测速度与统计精确性,而且从同一个细胞中可以同时测得多种参数,为生物医学与临床检验学发展提供了一个全新的视角和强有力的手段。 流式细胞术 * FC500 * 常用荧光染料的特性 荧光染料 激发波长 (nm) 发射波长(nm) 用途 颜色 FITC 488 525 免疫荧光 绿色 PE(RD1) 488 575 免疫荧光 橙色 ECD 488 620 免疫荧光 橙红 PeCy5 488 675 免疫荧光 红 PI 488 620 DNA染色 橙红 PECy7 488 755 免疫荧光 深红 PerCP 488 670 免疫荧光 红 TO 488 525 RNA染色 绿 * PNH(阵发性睡眠性血红蛋白尿) * HbF(胎儿血红蛋白)检测 * 血小板计数新标准(双平台法) R = 红细胞数R3/血小板数R1(流式) 血小板数=红细胞数(血球仪)/R (国际血液学标准化委员会(ICSH)/国际实验血液学协会(ISLH) 2001) 灵敏度高(1- 400x109/L)， 重复性好，室内/室外变异系数均很小 尤其应用于血小板预输注病人的检测 (阈值:20x109/L) 谢谢！ 染色方法 革兰氏染色 瑞-吉染色 细胞化学染色 免疫组化染色 革兰氏染色与细胞壁 C.Gram（革兰）于1884年 发明的一种鉴别不同类型 细菌的染色方法。 革兰氏染色 革兰氏染色 1、用碱性染料结晶紫对菌液涂片进行初染 2、用碘溶液进行媒染，其作用是提高染料和细 胞间的相互作用从而使二者结合得更牢固。 3、用乙醇或丙酮冲洗进行脱色。在经历脱色后 仍将结晶紫保留在细胞内的为革兰氏阳性细 菌，而革兰氏阴性细菌的结晶紫被洗掉，细 胞呈无色。 4、用一种与结晶紫具有不同颜色的碱性染料对 涂片进行复染。例如复红，它使原来无色的 革兰氏阴性细菌最后呈现桃红到红色，而革 兰氏阳性细菌继续保持深紫色 细胞化学染色，是一种以形态为基础，结合运用化学或生物化学技术对血细胞内各种化学成分作定位、定性及半定量分析的方法。 用于研究血细胞生理、病理和化学结构；临床上为某些血液病的诊断、鉴别诊断、疗效观察、预后监测和发病机制的探讨，提供重要依据。 细胞化学染色 血细胞化学染色的基本要求是在原位显示细胞成分和结构，反应产物应是有色沉淀物，具有一定的稳定性。 血细胞化学染色可显示糖原、脂类、酶、蛋白质等。 （一）固定 固定有物理法与化学法， 物理法为干燥和火焰固定， 化学法最常用的是甲醛、乙醇、丙酮和醋酸等。 血细胞化学染色流程 （二）显示 1、偶氮偶联法：利用人工合成的酶底物，在酶作用下，产生分解产物，再与重氮盐结合引起偶氮偶联，使其形成不溶性的偶氮色素，以此证明酶的存在。 2、联苯胺法：粒细胞和单核细胞中的过氧化物酶作用于过氧化氢，释放新生态氧，使无色的联苯胺形成蓝色沉淀。 3、普鲁士蓝法：细胞内、外铁与酸性亚铁氰化钾作用，形成蓝色亚铁氰化铁沉淀。 4、雪夫反应：过碘酸氧化细胞内糖类中乙二醇基形成乙醛基，醛基与雪夫试剂作用，使无色品红形成红色沉淀。 5、金属沉着法 其他尚有物理学方法，如脂溶性染料染色（显示脂质）、荧光显示、放射自显影以及体外活体染色亦常用于临床血液细胞学诊断。 （三）细胞化学定量 粗略估量，以染色反应的强弱，受色的深浅，人为地区别为阴性和各种程度的阳性。 百分法，只