- 1、本文档共6页,可阅读全部内容。
- 2、有哪些信誉好的足球投注网站(book118)网站文档一经付费(服务费),不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
- 3、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。如您付费,意味着您自己接受本站规则且自行承担风险,本站不退款、不进行额外附加服务;查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档,您可以点击 这里二次下载。
- 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“版权申诉”(推荐),也可以打举报电话:400-050-0827(电话支持时间:9:00-18:30)。
查看更多
111實验十一DNA的粗提取与鉴定
实验十一 DNA的粗提取与鉴定
教学目的
初步掌握DNA粗提取和鉴定的方法。
观察提取出来的DNA物质。
实验原理
DNA在NaCl溶液中的溶解度是随NaCl的浓度变化而改变的。DNA在0.14mol/L的NaCl溶液中的溶解度最低,据此可使溶解于NaCl溶液中的DNA析出。
DNA不溶于酒精溶液,但细胞中某些物质可以溶于酒精溶液,据此可提取杂质较少的DNA。
DNA+二苯胺蓝色(用于DNA的鉴定)
实验步骤
1.材料制备
0.1G/ml柠檬酸钠100ml
500ml烧杯→玻璃棒搅拌→1000r/min离心2min→吸去上清液→
活鸡血180ml
即得鸡血细胞液(也可将上述烧杯置于冰箱中,静置一天使鸡血细胞自行沉淀)
2.方法步骤
取血细胞液5-10ml+20ml蒸馏水,玻璃棒沿一个方向快速搅拌
(1)提取血细胞核物质 纱布过滤,滤液中含DNA和其他核物质,如蛋白质
原理:血细胞的细胞膜、核膜吸水胀破,玻璃棒快速搅拌机械加速血细胞破裂
(2)溶解核内DNA:滤液+2mol/LNaCl溶液40ml,玻璃棒沿一个方向搅拌
(3)析出含DNA的粘稠物:向上述溶液中缓缓加入蒸馏水,并轻轻地沿一个方向搅拌,出现丝状物,当丝状物不再增加时,停止加水(此时NaCl溶液相当于稀释到0.14mol/L)
(4)滤取含DNA的粘稠物:用多层纱布过滤,含DNA的粘稠物留在纱布上
(5)DNA粘稠物再溶解: 20ml2mol/LNaCl溶液 50ml烧杯,
上述粘稠物 缓慢搅拌3 min
(6)过滤含DNA的2mol/LNaCl溶液:用2层纱布过滤,滤液中含DNA
(7)提取含杂质较少的DNA:上述溶液+95%酒精,缓慢搅拌,出现乳白色丝状物,用玻璃棒将丝装物卷起。
(8)DNA鉴定:
实验关键:
本实验成功的关键是获取较纯净的DNA,因此应注意:
1.充分搅拌鸡血细胞液。DNA存在于鸡血细胞核中。将鸡血细胞与蒸馏水混合以后,应用
玻璃棒沿一个方向快速搅拌,使血细胞加速破裂,并释放出DNA
2.沉淀DNA必须用冷酒精。实验前必须准备好大量95%的酒精,并在冰箱中(5℃以下)至少存放24小时。
3.正确搅拌含有悬浮物的溶液。在第(3)、(5)步骤,玻璃棒不要直插烧杯底部,且搅拌要轻缓,以便获得较完整的DNA分子。在步骤(7),要将玻璃棒插入烧杯溶液中间,用手缓慢转动5-10min。
【同类题库】
.在“DNA的粗提取与鉴定”的实验中分别使用2mol/L、0.14mol/L、2mol/L、0015mol/L的氯化钠溶液,其作用分别是(A)
A.溶解、析出、溶解、溶解 C.溶解、溶解、析出、溶解
B.析出、溶解、析出、溶解 D.溶解、析出、溶解、析出
.下列图示中能反映DNA溶解度与NaCI溶液浓度之间关系的是(C)
.DNA在下列哪种浓度的NaCl溶液中溶解度最低(B)
A.2.00mol/L B.0.14 mol/L C.0.015 mol/L D.0.10 mol/L
.在DNA的粗提取过程中,初步析出DNA和提取较纯净的DNA所用的药品的浓度和名称分别是(B)
①0.1 g/ml的柠檬酸钠溶液 ②2.00mol/L的NaCl溶液 ③0.14 mol/L的NaCl溶液 ④体积分数为95%的酒精溶液 ⑤0.015 mol/L的NaCl溶液 ⑥0.04 mol/L的NaCl溶液
A.①③⑤ B.③④ C.②④ D.②③④
.与析出DNA粘稠物有关的叙述,不正确的是(C)
A.操作时缓缓滴加蒸馏水,降低DNA的溶解度
B.在操作A时,用玻璃棒轻缓搅拌,以保证DNA分子完整
C.加蒸馏水可同时降低DNA和蛋白质的溶解度,两者均可析出
D.当丝状粘稠物不再增加时,此时NaCl的浓度约为0.14mol/L.
.(多选)下列有关“DNA粗提取”的操作中,正确的是(ABCD)
A.在鸡血细胞液中加入蒸馏水
B.在“析出DNA粘稠物”时,要缓缓加入蒸馏水,直至溶液中粘稠物不再增多
C.在用酒精凝集DNA时,要使用冷酒精
D.用玻璃棒搅拌时要沿一个方向
.“DNA的粗提取与鉴定实验”中有三次过滤:
(1)过滤用蒸馏水稀释过的鸡血细胞液。
(2)过滤含粘稠物的0.14mol/L NaCl .
(3)过滤溶解有DNA的2mo
文档评论(0)