111實验十一DNA的粗提取与鉴定.doc

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111實验十一DNA的粗提取与鉴定

实验十一 DNA的粗提取与鉴定 教学目的 初步掌握DNA粗提取和鉴定的方法。 观察提取出来的DNA物质。 实验原理 DNA在NaCl溶液中的溶解度是随NaCl的浓度变化而改变的。DNA在0.14mol/L的NaCl溶液中的溶解度最低,据此可使溶解于NaCl溶液中的DNA析出。 DNA不溶于酒精溶液,但细胞中某些物质可以溶于酒精溶液,据此可提取杂质较少的DNA。 DNA+二苯胺蓝色(用于DNA的鉴定) 实验步骤 1.材料制备 0.1G/ml柠檬酸钠100ml 500ml烧杯→玻璃棒搅拌→1000r/min离心2min→吸去上清液→ 活鸡血180ml 即得鸡血细胞液(也可将上述烧杯置于冰箱中,静置一天使鸡血细胞自行沉淀) 2.方法步骤 取血细胞液5-10ml+20ml蒸馏水,玻璃棒沿一个方向快速搅拌 (1)提取血细胞核物质 纱布过滤,滤液中含DNA和其他核物质,如蛋白质 原理:血细胞的细胞膜、核膜吸水胀破,玻璃棒快速搅拌机械加速血细胞破裂 (2)溶解核内DNA:滤液+2mol/LNaCl溶液40ml,玻璃棒沿一个方向搅拌 (3)析出含DNA的粘稠物:向上述溶液中缓缓加入蒸馏水,并轻轻地沿一个方向搅拌,出现丝状物,当丝状物不再增加时,停止加水(此时NaCl溶液相当于稀释到0.14mol/L) (4)滤取含DNA的粘稠物:用多层纱布过滤,含DNA的粘稠物留在纱布上 (5)DNA粘稠物再溶解: 20ml2mol/LNaCl溶液 50ml烧杯, 上述粘稠物 缓慢搅拌3 min (6)过滤含DNA的2mol/LNaCl溶液:用2层纱布过滤,滤液中含DNA (7)提取含杂质较少的DNA:上述溶液+95%酒精,缓慢搅拌,出现乳白色丝状物,用玻璃棒将丝装物卷起。 (8)DNA鉴定: 实验关键: 本实验成功的关键是获取较纯净的DNA,因此应注意: 1.充分搅拌鸡血细胞液。DNA存在于鸡血细胞核中。将鸡血细胞与蒸馏水混合以后,应用 玻璃棒沿一个方向快速搅拌,使血细胞加速破裂,并释放出DNA 2.沉淀DNA必须用冷酒精。实验前必须准备好大量95%的酒精,并在冰箱中(5℃以下)至少存放24小时。 3.正确搅拌含有悬浮物的溶液。在第(3)、(5)步骤,玻璃棒不要直插烧杯底部,且搅拌要轻缓,以便获得较完整的DNA分子。在步骤(7),要将玻璃棒插入烧杯溶液中间,用手缓慢转动5-10min。 【同类题库】 .在“DNA的粗提取与鉴定”的实验中分别使用2mol/L、0.14mol/L、2mol/L、0015mol/L的氯化钠溶液,其作用分别是(A) A.溶解、析出、溶解、溶解 C.溶解、溶解、析出、溶解 B.析出、溶解、析出、溶解 D.溶解、析出、溶解、析出 .下列图示中能反映DNA溶解度与NaCI溶液浓度之间关系的是(C) .DNA在下列哪种浓度的NaCl溶液中溶解度最低(B) A.2.00mol/L B.0.14 mol/L C.0.015 mol/L D.0.10 mol/L .在DNA的粗提取过程中,初步析出DNA和提取较纯净的DNA所用的药品的浓度和名称分别是(B) ①0.1 g/ml的柠檬酸钠溶液 ②2.00mol/L的NaCl溶液 ③0.14 mol/L的NaCl溶液 ④体积分数为95%的酒精溶液 ⑤0.015 mol/L的NaCl溶液 ⑥0.04 mol/L的NaCl溶液 A.①③⑤ B.③④ C.②④ D.②③④ .与析出DNA粘稠物有关的叙述,不正确的是(C) A.操作时缓缓滴加蒸馏水,降低DNA的溶解度 B.在操作A时,用玻璃棒轻缓搅拌,以保证DNA分子完整 C.加蒸馏水可同时降低DNA和蛋白质的溶解度,两者均可析出 D.当丝状粘稠物不再增加时,此时NaCl的浓度约为0.14mol/L. .(多选)下列有关“DNA粗提取”的操作中,正确的是(ABCD) A.在鸡血细胞液中加入蒸馏水 B.在“析出DNA粘稠物”时,要缓缓加入蒸馏水,直至溶液中粘稠物不再增多 C.在用酒精凝集DNA时,要使用冷酒精 D.用玻璃棒搅拌时要沿一个方向 .“DNA的粗提取与鉴定实验”中有三次过滤: (1)过滤用蒸馏水稀释过的鸡血细胞液。 (2)过滤含粘稠物的0.14mol/L NaCl . (3)过滤溶解有DNA的2mo

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