111實验十一DNA的粗提取与鉴定.doc

实验十一 DNA的粗提取与鉴定 教学目的 初步掌握DNA粗提取和鉴定的方法。 观察提取出来的DNA物质。 实验原理 DNA在NaCl溶液中的溶解度是随NaCl的浓度变化而改变的。DNA在0．14mol/L的NaCl溶液中的溶解度最低，据此可使溶解于NaCl溶液中的DNA析出。 DNA不溶于酒精溶液，但细胞中某些物质可以溶于酒精溶液，据此可提取杂质较少的DNA。 DNA＋二苯胺蓝色（用于DNA的鉴定） 实验步骤 1．材料制备 0.1G/ml柠檬酸钠100ml 500ml烧杯→玻璃棒搅拌→1000r/min离心2min→吸去上清液→ 活鸡血180ml 即得鸡血细胞液（也可将上述烧杯置于冰箱中，静置一天使鸡血细胞自行沉淀） 2．方法步骤 取血细胞液5-10ml＋20ml蒸馏水，玻璃棒沿一个方向快速搅拌 （1）提取血细胞核物质 纱布过滤，滤液中含DNA和其他核物质，如蛋白质 原理：血细胞的细胞膜、核膜吸水胀破，玻璃棒快速搅拌机械加速血细胞破裂 （2）溶解核内DNA：滤液＋2mol/LNaCl溶液40ml，玻璃棒沿一个方向搅拌 （3）析出含DNA的粘稠物：向上述溶液中缓缓加入蒸馏水，并轻轻地沿一个方向搅拌，出现丝状物，当丝状物不再增加时，停止加水（此时NaCl溶液相当于稀释到0．14mol/L） （4）滤取含DNA的粘稠物：用多层纱布过滤，含DNA的粘稠物留在纱布上 （5）DNA粘稠物再溶解： 20ml2mol/LNaCl溶液 50ml烧杯， 上述粘稠物 缓慢搅拌3 min （6）过滤含DNA的2mol/LNaCl溶液：用2层纱布过滤，滤液中含DNA （7）提取含杂质较少的DNA：上述溶液＋95%酒精，缓慢搅拌，出现乳白色丝状物，用玻璃棒将丝装物卷起。 （8）DNA鉴定： 实验关键： 本实验成功的关键是获取较纯净的DNA，因此应注意： 1．充分搅拌鸡血细胞液。DNA存在于鸡血细胞核中。将鸡血细胞与蒸馏水混合以后，应用 玻璃棒沿一个方向快速搅拌，使血细胞加速破裂，并释放出DNA 2．沉淀DNA必须用冷酒精。实验前必须准备好大量95%的酒精，并在冰箱中（5℃以下）至少存放24小时。 3．正确搅拌含有悬浮物的溶液。在第（3）、（5）步骤，玻璃棒不要直插烧杯底部，且搅拌要轻缓，以便获得较完整的DNA分子。在步骤（7），要将玻璃棒插入烧杯溶液中间，用手缓慢转动5-10min。 【同类题库】 ．在“DNA的粗提取与鉴定”的实验中分别使用2mol／L、0．14mol／L、2mol／L、0015mol／L的氯化钠溶液，其作用分别是（A） A．溶解、析出、溶解、溶解 C．溶解、溶解、析出、溶解 B．析出、溶解、析出、溶解 D．溶解、析出、溶解、析出 ．下列图示中能反映DNA溶解度与NaCI溶液浓度之间关系的是（C） ．DNA在下列哪种浓度的NaCl溶液中溶解度最低（B） A．2．00mol/L B．0．14 mol/L C．0．015 mol/L D．0．10 mol/L ．在DNA的粗提取过程中，初步析出DNA和提取较纯净的DNA所用的药品的浓度和名称分别是（B） ①0．1 g/ml的柠檬酸钠溶液 ②2．00mol/L的NaCl溶液 ③0．14 mol/L的NaCl溶液 ④体积分数为95%的酒精溶液 ⑤0．015 mol/L的NaCl溶液 ⑥0．04 mol/L的NaCl溶液 A．①③⑤ B．③④ C．②④ D．②③④ ．与析出DNA粘稠物有关的叙述，不正确的是（C） A．操作时缓缓滴加蒸馏水，降低DNA的溶解度 B．在操作A时，用玻璃棒轻缓搅拌，以保证DNA分子完整 C．加蒸馏水可同时降低DNA和蛋白质的溶解度，两者均可析出 D．当丝状粘稠物不再增加时，此时NaCl的浓度约为0.14mol/L. ．（多选）下列有关“DNA粗提取”的操作中，正确的是（ABCD） A．在鸡血细胞液中加入蒸馏水 B．在“析出DNA粘稠物”时，要缓缓加入蒸馏水，直至溶液中粘稠物不再增多 C．在用酒精凝集DNA时，要使用冷酒精 D．用玻璃棒搅拌时要沿一个方向 ．“DNA的粗提取与鉴定实验”中有三次过滤： （1）过滤用蒸馏水稀释过的鸡血细胞液。 （2）过滤含粘稠物的0.14mol/L NaCl . （3）过滤溶解有DNA的2mo