流式细胞术应用概述__培训课件.ppt

3、流式细胞术CFSE染色分析细胞分裂增殖 Divisions: 3 2 1 0 CFSE FL-1 (Log) Divisions: 3 2 1 0 实验原理 Calculating precursor frequency 0 1590 /1 1590 1 1140 /2 570 2 1388 /4 347 3 687 /8 86 4 41 /16 2.6 Total; 2595 Cohort Total; 1005.6 % original cells dividing is 1005.6divided by (2595 + 1005.6) = 38.7% Lyons (2000) J. Imm. Meth. 243, 147 Parent: 1.22 % at 200.00 Generation 2: 2.83 % at 180.81 Generation 3: 5.67 % at 161.62 Generation 4: 8.48 % at 142.43 Generation 5: 7.31 % at 123.24 Generation 6: 18.99 % at 104.05 Generation 7: 35.96 % at 84.86 Generation 8: 19.43 % at 65.67 Generation 9: 0.00 % at 46.48 Generation 10: 0.12 % at 27.29 Upper Generation P.I.: 22.63 Precursor Frequency: 0.616768 Number of Cells Analyzed: 2989 Reduced Chi-Square: 0.981 ModFit软件可以自动分析和计算 4、流式微球分析 Cytometric Bead Array（CBA） CBA与ELISA相比优点 “多元”和“同步”检测 样本量少 灵敏度相似 稳定性好 Cytometric Bead Array 结果举例 本室已有的流式细胞术检测平台 HLA-B27流式检测 淋巴细胞亚群流式检测 血小板抗体流式检测 造血干/祖（CD34+）细胞流式检测 活化T细胞（CD3/HLA-DR/CD25）流式检测 活化单核细胞(CD14/HLA-DR) 流式检测 调节性T细胞（Treg）流式检测 白血病流式免疫分型 多发性骨髓瘤流式免疫分型 DNA倍体和细胞周期分析 白血病细胞起源、分化和生物学行为不同，构成了白血病的异质性，因此急性白血病的全面、正确分型是准确、及时治疗的前提。急性白血病的分型基本上分三个阶段： FAB分型(1976) (morphology，M ) MIC分型（1986） (morphology，M ) (immunology， I ) ( cytogenetics，C ) WHO分型(2001) （MICM） (morphology，M ) (immunology， I ) ( cytogenetics，C) (molecular biology, M) 急性白血病分型历史 急淋 （ALL） 急性白细胞FAB分型 急非淋 （ANLL） 急性髓细胞白血病(AML) L1型 L2型 L3型 M0: 微分化型髓系白血病； M1：未分化的原粒细胞白血病； M2：部分分化的原粒细胞白血病； M3：急性早幼粒细胞白血病； M4：急性粒、单核细胞白血病； M5：急性单核细胞白血病； M6：急性红血病或红白血病； M7：急性巨核细胞白血病。 MIC分型以形态学为基础、免疫学和细胞遗传学作补充，相互结合，使分型更趋精确。其中免疫学分型是另外两种方法的重要补充。 MIC分型 形态学 (morphology， M ) ：传统的骨髓片检查 免疫学 (immunology， I ) ：免疫组化 流式细胞术 细胞遗传学 ( cytogenetics，C ) ：染色体分型 利用荧光素标记的单克隆抗体鉴定细胞表面或细胞内的免疫标志，可准确反映白血病细胞的所属系列（T\B\髓）及分化程度。 检测分析时，首先根据CD45表达强弱和细胞颗粒度，在CD45-SSC图中确定幼稚或异常的细胞群体。然后分析检测各种标志的表达情况及其阳性率。 白血病免疫分型原理 流式细胞术白血病免疫分型优点 细胞形态学，免疫学和细胞遗传学三者相结合是当今公认的白血病分型方案，其中免疫学分型是另外两种方法的重要补充。流式细胞仪可方便、快速、准确地完成白血病的免疫学分型，其意