紫外杀菌效果实验设计.doc

紫外杀菌效果的检测 一、实验目的 1.了解紫外线杀菌的原理。 2.分析影响紫外线杀菌效果的因素及其影响程度。 3.学会用控制变量法分析实验现象。 4.进一步巩固微生物的培养及平板计数法的操作方法。 实验原理 除光合细菌外，一般细菌都不喜欢光线。许多微生物在日光直接照射下容易死亡，特别是病原微生物。日光中具有杀菌作用的主要成分是紫外线。细菌细胞吸收紫外线后，会因其蛋白质和核酸发生变化而引起死亡。 紫外线是非电离辐射，以波长265-266nm的杀菌力最强。紫外辐射对微生物有明显的致死作用，是强杀菌剂。紫外线杀死细胞的主要原理是紫外线会破坏细胞中的蛋白质、DNA，使DNA中的胸腺嘧啶结合成胸腺嘧啶二合体，影响转录和复制，从而杀死细胞，因此紫外线常用于紫外诱变。但紫外线的穿透性很弱，因此只有表面杀菌能力，紫外线不能透过普通玻璃，但可以透过一定厚度的空气。一般细菌在紫外线下照射5min即能被杀死，芽孢则需10min。而紫外线距离细菌的远近也影响着紫外线的杀菌效果。 杀菌率 η= N/N0×100%， N为杀菌处理后的细菌数（个/L),NO为杀菌处理前的细菌数（个/L). 主要仪器设备及耗材 器材：一盏20W普通型紫外线灯，培养皿，试管，移液管，玻璃柜，普通玻璃片，石英片，普通光学显微镜 菌种：枯草芽孢杆菌，金黄色葡萄球菌 试剂：牛肉膏蛋白胨培养基，无菌水 实验步骤 （一）、菌种的制备 1.将所需数量的培养皿、试管、移液管等洗涤干净并灭菌。 2.配制牛肉膏蛋白胨培养基，分装，分装好后马上进行灭菌处理。将枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌菌种接种到已处理好的固体培养基中。 3.将接种好的固体培养基加热至40℃—50℃使其融化成液体培养基。 4.将已培养好的枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌试样用无菌水稀释到适宜浓度。 （二）、检测照射时间对紫外杀菌效果的影响 1.准备好两个方形大普通玻璃柜分别为玻璃柜1和玻璃柜2（两个玻璃柜中均为无菌环境），将紫外灯安装在玻璃柜1的柜壁上，玻璃柜2中不放置紫外灯，其他环境条件与玻璃柜1相同。 2.用试管取1ml已计数好细菌数量的枯草芽孢杆菌液，记为试管1，另取一试管装入同一浓度下的枯草芽孢杆菌液1ml，并计好数，记为试管2. 3.以同样方法取两支金黄色葡萄球菌液，并分别记为试管3和试管4. 4.将试管1和试管3放入玻璃柜1中距离紫外灯5cm处，同时将试管2和试管4放入玻璃柜2中（对照试验），并开始计时。 5.分别在杀菌3min,5min,6min,7min,8min,后从四支试管中取样，并用平板计数法计所剩细菌数，并记录在表格一中。 （三）、检测紫外灯离菌距离对杀菌效果的影响 1.取六支已装入计好数的枯草芽孢杆菌液，分别标记为试管1a,试管1b，试管1c，试管2a，试管2b和试管2c。 2.已同样方法取6支已装入计好数的金黄色葡萄球菌液，分别标记为试管3a,试管3b，试管3c，试管4a，试管4b和试管4c。 3.将试管1a和试管3a放入玻璃柜1中距离紫外灯5cm处,将试管1b和试管3b放入玻璃柜1中距离紫外灯10cm处，将试管1c和试管3c放入玻璃柜1中距离紫外灯15cm处。同时将对应的试管放置在玻璃柜2中同一位置处。 4.杀菌5min，取出所有试管并取样计数。将所得数据记录表格二中。 （四）、检测紫外线的穿透力 1.如上述步骤（二）中取试管1,2,3,4。 2.将试管1和试管3放入玻璃柜1中距离紫外灯5cm处，同时将试管2和试管4放入玻璃柜2中（对照试验），杀菌5min，取出样并计数，将所得结果记录表格三中。 3.用一块已杀菌的普通玻璃玻璃柜1中将紫外灯罩住，再用这里2中同样方法杀菌、计数。 4.用一块已杀菌的石英将玻璃柜1中紫外灯罩住，用上述同样方法杀菌、计数，并记录在表格中。 实验数据及处理结果 表格一： 试管1 试管2 试管3 试管4 杀菌前细菌数（个/L） 杀菌3min细菌数 杀菌5min细菌数 杀菌6min细菌数 杀菌7min细菌数 杀菌8min细菌数 表格二： 试管1 试管2 试管3 试管4 1a 1b 1c 2a 2b 2c 3a 3b 3c 4a 4b 4c 杀菌前细菌数（个/L） 距离紫外灯5cm处 距离紫外灯10cm处 距离紫外灯15cm处 表