多巴胺、抗坏血酸的电化学方法测定[精选].ppt

多巴胺、抗坏血酸的电化学方法测定 小组成员：范英伟 陈健美 骆奋强 黄晓群 周华希 郭杨 蔡惠坚 邱春燕 一、实验目的 1、制作铅笔芯电极 2、掌握CHI660C电化学工作仪的使用方法 3、对电化学活性物质多巴胺、抗坏血酸进行不同电化学方法的测定，如循环伏安法（CV），差分脉冲伏安法（DPV），常规脉冲伏安法（NPV），方波伏安法（SWV）等。并对不同的电化学测定方法的精密度和灵敏度进行比较。 二、实验仪器及药品 1、CHI660C电化学工作站； 2、三电极工作体系：饱和甘汞电极（SCE）为参比电极，铂丝为对电极，工作电极为玻碳电极（GC，d=3mm）或铅笔芯电极（d=0.5mm）； 3、多巴胺(DA)；抗坏血(AA); 4、5mM[Fe(CN)6]3-溶液；PBS缓冲（pH=6.86）；固体NaCl；固体NaOH；硼砂缓冲液（pH=9.18）；二次水。 三、DA与AA的电化学氧化机理 四、实验步骤 1、制作铅笔芯电极 2、校正PH计(两点定位法) （由于pH计接触不良, 在调解时出现数字不能稳定的现象） 3、（1）电极处理 玻碳电极以及铅笔芯电极先用0.05um的 α-Al2O3抛光至镜面，然后用二次水清洗待用。 （2）电极表征 在0.5MNaCl+5mM[Fe(CN)6]3-溶液中用CV法扫描，当峰电位差在60-80mV时，为很好的可逆反应。同时检查电极表面的清洁度,避免有杂质。 4、抗坏血酸（AA）的测定 （1）电解液的配制 配制0.025M PBS缓冲液(pH=6.864)250ml，加入0.3656g NaCl(25mM)作为支持电解质。（一般来说支持电解质的量比测定物的量要大很多倍。） （2） AA标准溶液的配制 首先配制5×10-2M的AA高浓度溶液，取一定量的溶液加入定量的PBS缓冲液 (含25mM NaCl），用缓冲液稀释成不同浓度的AA标准溶液 10-5M、2×10-5M、4×10-5M、6×10-5M、8×10-5M、10×10-5M。 （3）用不同的电化学方法进行测定（分两组，一组以玻碳电极作为工作电极，一组以铅笔芯电极作为工作电极） A、配制浓度为5×10-4M的AA溶液，选择CV改变扫描速度，测定扫描速度为10mv/s, 50mv/s, 100mv/s, 150mv/s, 200mv/s, 500mv/s, 1000mv/s的CV图，作Ip-V (峰电流与扫速)和Ip-V1/2的线性关系图。 B、取5×10-4M AA溶液，选择CV固定扫速为100mv/s连续扫描20圈。 C、作不同浓度的AA的NPV测定结果叠加图，固定扫速为100mv/s 。 D、作不同浓度的AA的DPV测定结果叠加图，固定扫速为100mv/s 。 E、作不同浓度的AA的SWV测定结果叠加图，固定扫速为100mv/s 。 5、多巴胺（DA）的测定 （1）电解液的配制 配制0.2M PBS缓冲液(pH 6.864)250ml，加入0.3656g NaCl(25mM)作为支持电解质。 （2）DA标准溶液的配制 首先配制0.01M的DA高浓度溶液，取一定量的溶液加入定量的PBS缓冲液 (含25mM NaCl），用缓冲溶液稀释成不同浓度的DA标准溶液10-5M、2×10-5M、4×10-5M、6×10-5M、8×10-5M、10×10-5M。 （3）用不同的电化学方法进行测定（分两组 一组以玻碳电极作为工作电极，一组以铅笔芯电极作为工作电极） A、配制DA浓度为0.01M，选择CV改变扫描速度，测定了扫描速度为10mv/s, 50mv/s, 100mv/s, 150mv/s, 200mv/s, 500mv/s, 1000mv/s的CV图，作Ip-V(峰电流与扫速)和Ip-V1/2的线性关系图。 B、取1×10-4M DA溶液，选择CV固定扫速为100mv/s连续扫描20圈。 C、作不同浓度的DA的NPV测定结果叠加图，固定扫速为100mv/s 。 D、作不同浓度的DA的DPV测定结果叠加图，固定扫速为100mv/s 。 E、作不同浓度的DA的SWV测定结果叠加图，固定扫速为100mv/s 。 （1）CV法对AA连续扫描20圈（固定扫速为100mv/s，电解液均为5×10-4M的AA溶液 ） 用CV法测定PBS缓冲液（空白对照） 峰电流与扫速的关系图（电解液为5×10-4M的AA溶液） 不同浓度AA的DPV、NPV 、SWV曲线图（玻碳电极） 不同浓度AA的DPV、SWV、NPV曲线图（铅笔芯电极） NPV 、DPV、SWV的峰电