精液分析与规范化2__培训课件.ppt

* 参考值范围 WHO 版本 2 3 4 5 年 1987 1992 1999 2010 参考值 正常 正常 参考 百分位数 5 50 95 精液量. (ml) 2.0 2.0 2.0 1.5 3.7 6.8 总数(M) 40 40 40 39 255 802 精子密度 (M/ml) 20 20 20 15 73 213 前向运动 (%) 50 50 50 32 55 72 存活(%) 50 75 75 58 79 91 正常形态 (%) 50 30 (15) 4 15 44 * 新版手册制订的参考值范围 参数 参考值下限 精液体积（ml） 1.5（1.4-1.7） 精子总数（106 / 次射精） 39（33-46） 精子密度（106/ml） 15（12-16） 总活动率（PR+NP，%） 40（38-42） 前向活动率（PR，%） 32（31-34） 精子存活率（%） 58（55-63） 精子形态学（正常形态，%） 4（3.0-4.0） 精液pH ≥7.2 * 小 结 1、掌握标准化的程序分析和方法，是提高精液检 验的准确性的关键； 2、做好实验室的设备的标准化； 3、强化实验室技术人员的标准化培训。 4、创造条件，研究和制定国人的参考值。 * 谢 谢！ 思考交流 准确计数精子的首要4个前提条件？ 如何判断无精子症？ WHO5版要求精子计数至少要计数多少个？精子量多时如何稀释？ * John James Rickard Macleod * “精液分析” 部分的修订主要涉及 * 对于液化不全精液标本，可以加入1%的10mg/ml的糜蛋白酶，混匀后置37℃水浴箱中温育30分钟后，精液液化可明显改进。此操作不影响精浆生化指标包括@葡糖苷酶、酸性磷酸酶和果糖的检测，但精子运动指标中直线性可显著降低（P＝0.025），侧摆幅度可显著升高（P＝0.029），而其他指标如精子密度、活动率、a+b级活动率、直线运动速度、曲线运动速度、鞭打频率、平均路径速度等不受影响。机械混匀或菠萝蛋白酶对促进精液液化可能也起作用。这样的操作应记录在检测报告上。 * 精子存活率?????精子存活率以活精子所占百分比表示，可用染色技术确定，一般采用伊红染色法。这是由于死精子的细胞膜受损可透入一定染料，从而使死精子着色而活精子不着色。用光学显微镜计数200个精子，即可得出精子存活率。伊红Y染色法：用生理盐水将伊红配制成5g/L的溶液，将一滴新鲜精液与一滴伊红Y溶液在载玻片上混匀，并覆以盖玻片，30秒后用光学显微镜观察，活精子不着色，死精子被染成红色 * 对同一计数池进行两次计数或对同一次稀释填充的两个计数池进行计数都不是真正的重复计数，因为这样并没能对采样、混合及稀释所造成的误差进行检测。 * 为了减低抽样误差，必须计数足够数量的精子。 * 2、选择“单侧”，是因为：精液较高的测定值与生育力减退无关。 * 如何判断隐匿精子症？ * * 注 意 成功的第三步 WHO5要求：抽样误差5%。 检测精子总数在400条时抽样误差为5%。检测精子总数在200条时抽样误差为7.1%.检测精子总数在100条时抽样误差为10%。抽样误差10%不可取。 * 一、精子计数 每400倍视野中的精子数 稀释倍数 （精液和稀释液） 15 1：5 (1+4) 15- 40 1：10 (1+9) 40- 200 1：20 (1+19) 200 1：50 (1+49) * 稀释 个数 / HP 观测 WHO4 更多更高 1+49 1+19 1+9 1+4 200 40-200 15-40 15 中央格 (#5) 5, 10, 25小正方形 WHO5 更少更低 1+19 1+4 1+1 100 16-100 2-15 3个格 (#4, 5, 6) 1排(20 nl) 一、精子计数 成功的第四步 计算机辅助精液分析 (Computer-aided sperm analysis CASA) * 精子计数 校准： 1、图像校准 2、手工计数校准 注意事项 1、自身的波动性 精子浓度：一次/w，连续120w