血流感染标本和呼吸道标本操作规范及临床意义__培训课件.ppt

弹性纤维 库什曼螺旋体 呈链排列的革兰阳性球菌和革兰阴性球杆菌。缺乏鳞状上皮细胞提示混合厌氧菌感染 你看见多少种形态？ 几种细菌的混合形态，缺乏鳞状上皮细胞=混合厌氧菌感染。如果是呼吸道标本可能是吸入性肺炎。报告临床医生“提示吸入性肺炎” 呼吸道标本中未被染色的，有折射的杆菌=抗酸杆菌 呈链排列的革兰阳性球菌？或革兰阳性分枝杆菌？ 肺中的结节吸出物，不规则“球菌”，分叉，无短链，链的末端的呈尖状，都证明是分枝状的革兰阳性杆菌，可能是放线菌或诺卡菌（通常来自脑或肺组织的标本） 肺炎-可接受的 不合格标本 评述 很少的鳞状上皮细胞 10个每低倍视野 许多鳞状上皮 10个/低倍视野 可以在玻片上看到许多鳞状上皮细胞，说明在采集时受到了上呼吸道分泌物的污染或口水的污染。 很多的中性粒细胞 很少有或没有中性粒细胞 免疫抑制的病人也会出现中性粒细胞减少 中性粒细胞和上皮细胞都很少的标本需要培养 很多中性粒细胞混合有形态多样的细菌（革兰氏阴性杆菌，纺锤形，革兰氏阳性球菌） 吸入性肺炎标本革兰氏染色的典型形式，培养只会培养出正常菌群，所以革兰氏染色是用于诊断的方法。 许多或中等量的中性粒细胞，以一种形态的细菌为主 酵母菌样，酵母菌是一种很少引起肺炎的细菌，常由口腔污染 成双革兰氏阳性球菌，短链=肺炎链球菌 革兰氏阳性菌成群排列=金黄色葡萄球菌 革兰氏阴性球杆菌（小）=流感嗜血杆菌 革兰氏阴性杆菌大且肥厚=肺炎克雷伯菌或其他肠道菌 革兰氏阴性双球菌=卡他莫拉菌 许多不着色的有折射的杆状细菌 可能是肺结核，抗酸杆菌不能被革兰氏染色所染色。 呼吸道标本的涂片评估模式 痰标本的培养 前处理：用无菌盐水将痰洗涤3次，除去痰液表面的常居菌，加入等量的1%胰酶溶液（PH7.6），35℃30min，使痰液均值化后备用。 分离培养：处理后的痰液分区划线接种于血琼脂平板、嗜血巧克力平板和麦康凯（或EMB、中国蓝）琼脂平板，置5%-10%CO2环境中，35℃培养18-24h，根据菌落及形态（革兰染色）特点，作出初步判断。 常用培养基作用及成分 血平板：判读细菌在体内的基本生长情况，分离培养苛氧和非苛氧菌。 基础成分：特殊蛋白胨、淀粉、氯化钠、琼脂粉、蒸馏水。 特殊成分：脱纤维绵羊血，鉴别溶血反应和提供X因子（血红素）。 嗜血巧克力平板：分离培养苛氧菌，尤其适用与嗜血杆菌。 基础成分：特殊蛋白胨、淀粉、氯化钠、琼脂粉、蒸馏水。 特殊成分：血红蛋白粉和NAD分别含X因子和V因子，嗜血杆菌生长所必须；万古霉素，抑制阳性菌生长。 麦康凯：用于检测大肠菌群和肠道致病菌。 基础成分：蛋白胨、氯化钠、琼脂粉、蒸馏水。 特殊成分：乳糖和中性红，大肠菌群为粉红/红色，肠道致病菌为透明；3号胆盐和结晶紫，抑制阳性菌及真菌生长。 平板的初步判读 条件致病菌：又为机会致病菌，在某种特定的条件下致病的细菌，为人体正常菌群，但其聚集部位发生改变、机体抵抗力降低或菌群失调时可致病。痰标本的正常菌群主要以阳性菌为主。 接板、读板顺序：血平板、嗜血巧克力平板、麦康凯平板 血平板：反映细菌在体内的生长情况，用于半定量的判断，观察是否存在溶血、判断优势菌。 嗜血巧克力平板：抑制革兰阳性菌，革兰阴性菌及真菌生长良好，不能用于半定量的判断，主要用于流感嗜血杆菌鉴定。 平板的初步判读 流感嗜血杆菌：革兰阴性短小杆菌，氧化酶、触酶反应不定，嗜血巧克力平板上形成微小、无色透明似露滴状的菌落，有特殊气味。血平板可形成“卫星现象”。 鉴别诊断：流感：V+X因子；副流感：V因子 麦康凯平板：抑制革兰阳性菌及真菌，革兰阴性菌生长良好，不能用于半定量的判断，主要用于大肠菌群与肠道致病菌、非发酵菌的鉴定。 大肠菌群包括埃希菌属和肠杆菌科，发酵乳糖产酸，菌落颜色粉红或红色。 肠道致病菌、非发酵菌包括沙门、志贺、假单胞菌属、不动杆菌属等。不发酵乳糖，菌落颜色透明或半透明。 细菌的初步鉴定 一、判断溶血 α溶血：不完全溶血，主要有草链、肺链（湿润、脐窝状、OP阳性）、粪肠、屎肠等。 β溶血：完全溶血，主要有金葡、溶葡、甲型/乙型链球菌、铜绿、大肠、李斯特菌、芽孢杆菌（污染）等。 γ溶血：不溶血 二、观察菌落形态 革兰阴性杆菌：菌落较大、湿润、扁平、部分有特殊气味（大肠、铜绿）；革兰染色阴性。 革兰阳性球菌：菌落较小、干燥、凸起、部分有特殊气味（葡萄球菌属）；革兰染色阳性。 细菌的初步鉴定 三、生化鉴定 革兰阳性菌： 触酶阳性：葡萄球菌属、李斯特菌属等。 触酶阴性：链球菌菌、肠球菌属等。 凝固酶阳性：金葡、施氏葡、中间葡等 凝固酶阴性：表葡、溶葡、头葡等，致病力弱，需连续检出才能确定为致病菌。 革兰阴性菌： 氧化酶阳性：假单胞菌属、弧菌属、气单胞菌属、产碱杆菌属、奈瑟菌属等。 氧化酶阴性：埃希菌属、肠杆菌属、克雷伯菌