USP3462非無菌产品的微生物检测特殊微生物的检测.doc

62 非无菌产品的微生物检测：特殊微生物的检测 简介 下述试验用于在指定条件下可被检出的特殊微生物的的存在和限度。 试验设计主要物质或者制剂符合已经建立的微生物质量的。当用于这个目的时，说明操作，包括结果解释。其他微生物包括自动化法只要已被证明其等价于药典方法可以使用。用标准的稳定的试验菌株悬浮液或者将它们按以下步骤制备。种子批培养保留技术（种子批技术）用于接种的可用的微生物从原始开始不超过5。酪蛋白大豆酪蛋白大豆30-35℃，18-24h。将白色念珠菌培养于沙氏葡萄糖琼脂或肉汤培养基中2-3天。温度为20-25℃。 金黄色葡萄球菌如ATCC 6538NCIMB 9518,CIP 4.83或NBRC13276 绿脓杆菌 如ATCC9027,NCIMB8626,CIP82.118或NBRC13275 大肠杆菌如ATCC 8739NCIMB 8545,CIP 53.126或NBRC3972 血清型鼠伤寒沙门氏菌 如ATCC14028 血清型奥博尼沙门氏菌 如NBRC100797,NCTC6017或CIP80.39 白色念珠菌如ATCC 10231NCPF 3179,CIP 48.72或NBRC1594 用PH7.0的氯化钠蛋白胨缓冲液或PH7.2的磷酸盐缓冲液来制备菌悬液，在2h内应用或在2-8℃下24h应用。 梭菌属 采用产气荚膜梭菌如ATCC11437（NBRC14293,NCIMB12343,CIP100651）或ATCC19404（NCTC532或CIP79.03）或NBRC14293。在无氧条件下，将梭菌试验菌株培养于富营养培养基中24-48h，温度为30-35℃。然后稀释产气荚膜梭菌的新鲜营养物得到稳定的孢子悬浮液用于实验接种。将稳定的孢子悬浮液在有效期内储存于2-8℃的条件中。 阴性对照 为了验证实验条件，用所实验准备过程中的稀释剂做阴性对照。它不能有微生物生长。每一批好的培养基，脱水制备或者成分制备每一批培养基。 大肠杆菌、绿脓杆菌 大肠杆菌的检测 MacConkey肉汤培养基 促生长 大肠杆菌 抑制 金黄色葡萄菌 MacConkey琼脂培养基 促生长+指示 大肠杆菌 沙门氏菌的检测 Rappaport vassiliadis沙氏富营养肉汤培养基 促生长 鼠伤寒沙门氏菌、奥博尼沙门氏菌 抑制 金黄色葡萄菌 木糖、赖氨酸、脱氧胆酸琼脂培养基 促生长+指示 鼠伤寒沙门氏菌、奥博尼沙门氏菌 指示 大肠杆菌 绿脓杆菌的检测 溴化十六烷基三甲胺琼脂培养基 促生长 绿脓杆菌 抑制 大肠杆菌 金葡菌的检测 甘露醇琼脂培养基 促生长+指示 金黄色葡萄菌 抑制 大肠杆菌 梭菌的检测 梭菌富营养培养基 促生长 梭菌芽孢 哥伦比亚琼脂培养基 促生长 梭菌芽孢 白色念珠菌的检测 沙氏葡萄糖肉汤培养基 促生长 白色念珠菌 沙氏葡萄糖琼脂培养基 促生长+指示 白色念珠菌 培养基的促生长性能检测，液体培养基——接种少量的（≤100cfu）、合适的微生物菌种于培养基中，在指定温度下培养，时间不超过实验室菌种的最短培养时间。能获得与以前测试过的、经批准的培养基相比较有清晰可见的微生物生长酪蛋白大豆30-35℃，24-48h酪蛋白大豆30-35℃，18-24h。 酪蛋白大豆酪蛋白大豆酪蛋白大豆酪蛋白大豆酪蛋白大豆酪蛋白大豆30-35℃，18-24h。当检测贴剂时，取1副贴剂样品（看“61 非无菌产品的微生物检验：微生物计数检测”中的贴剂样品的制备）通过无菌薄膜进行过滤， 然后将膜放入100ml的酪蛋白大豆30-35 ℃，48h。然后取培养物在哥伦比亚琼脂培养基上次培养，条件为：无氧下30-35℃，48-72h。 诠释—— 若生长的厌氧棒状菌（有或无内生孢子）表现为过氧化氢酶试验阴性时，则为梭 菌。通过鉴别试验进行证明。 若生长菌落无上述现象或鉴别结果为阴性时，产品通过此项检测。 白色念珠菌 样品的制备与预前培养——按“61 非无菌产品的微生物检验：微生物计数检测”所述准 备样品，取10ml或相当于不少于1g或1ml产品的样品量接种到100ml的中沙氏葡萄糖肉 汤培养基中，混匀。培养条件为30-35℃，3-5天。 选择与次培养——在沙氏葡萄糖琼脂培养基中次培养，条件为30-35℃，24-48h。 诠释——若有白色菌落生长，则可能为白色念珠菌。通过鉴别试验进行证明。 若无上述菌落生长或鉴别结果为阴性时，产品通过此项检测。 推荐的溶液和培养基 注——这部分是给出的信息。 下列的溶液及培养基可满足药典微生物污染要求。PH7.0的氯化胨缓冲溶液磷酸二氢钾 3.6g 磷酸氢二钠 7.2g 等于0.067M的磷酸盐氯化钠 4.3g 蛋白胨（肉或酪蛋白）1.0g