1.电泳技术的临床应用-完整版解读.ppt

使用范围和检测原理 电泳技术就是利用在电场的作用下, 由于待分离样品中各种分子带电性质以及分子本身大小, 形状等性质的差异, 使带电分子产生不同的迁移速度, 从而对样品进行分离, 鉴定或提纯的技术. 在生化检测中, 主要用于分离各类蛋白分子. 发展历程 1809年俄国科学家列伊斯首先发现电泳现象 1937年瑞典科学家Tiselius建立了界面电泳技术, 并首次证明了血清是由白蛋白及α, β, γ球蛋白组成的因此获得1948年诺贝尔化学奖. 1950年后, 区带电泳从发展到成熟. 1980年以来, 毛细管电泳逐渐受到重视 常用的电泳技术 滤纸电泳 醋酸纤维素薄膜电泳 凝胶电泳 琼脂糖凝胶电泳 : 琼脂糖凝胶适用于蛋白质和核酸的电泳支持介质, 成本低, 结果易保存. 聚丙烯酰胺凝胶电泳 : 最常用的定性分析蛋白质的电泳方法, 特别是用于蛋白质纯度检测和测定蛋白质分子量, 一般用于科研. 毛细管电泳 :经典电泳技术和现代微柱分离相结合的产物 电泳技术的医学应用 蛋白质电泳分析是实验室必备的检测手段, 可全面精确, 描绘出患者蛋白质的全貌. 对疾病的早期诊断, 疗效观察及预后判断具有非常重要的临床价值. 蛋白的电泳检测 根据使用的染料或者是底物的不同，我们可以检测到不同类型的蛋白: 血清蛋白 脂蛋白(运送脂类) 各种酶类 血红蛋白 电泳技术在临检中的应用 急,慢性炎症 造血系统疾病: 多发性骨髓瘤, 巨免疫球蛋白血症 肾脏疾病 肝脏疾病 中枢神经系统疾病: 多发性硬化症 正确解释电泳结果为临床对疾病的判断提供可靠参考 蛋白染色 血清蛋白电泳后会呈现出5 或者 6 条带. 染色后,每个条带呈现出的不同程度的染色对应着各自的蛋白浓度. 如何检测染色程度: 需要使用光密度仪. 蛋白电泳检测的不同步骤 制备胶片, 加样, 启动电源,开始电泳, 染色, 脱色, 结果检测 血清蛋白电泳的目的是什么? 检测异常 : 含量的变化 : 条带中蛋白含量的增加或减少 性质的变化 : 异常条带的出现 临床意义 将电泳作为常规检测之一, 基于蛋白含量的变化, 有助于我们对以下疾病的筛查 : 炎症 营养不良 肺气肿 临床意义 对异常条带的筛查,有助于我们检测下列疾病: 骨髓瘤 巨球蛋白血症(Waldenstrom) 细菌和病毒感染 在这些情况下, 必须要做其他辅助测试, 比如说免疫固定, 使用不同类型的抗血清对异常蛋白进行检测. (对于后期治疗有很重要的指导意义) 电泳结果的临床应用及常见电泳结果分析 什么情况下必须进行电泳检测? A/G比例变化 血液沉降速度发生异常变化 出现恶性疾病征兆 在免疫球蛋白定量检测中发现 某一种免疫球蛋白出现大量异常增加 双白蛋白,或者一条宽峰,或者在白蛋白条带出现附属条带可能是由以下原因造成 : 遗传性双白蛋 暂时性的双白蛋白血症可能是由于药物刺激导致的 急性胰腺炎导致的双白蛋白血症 : 大量的胰酶的出现可以导致白蛋白降解 在下列情况下白蛋白会出现下降 : - 肾病综合症, 蛋白流失, 胃肠病: 检查尿蛋白 - 淋巴细胞增生综合征 - 营养不良 - 肝脏功能不全 - 慢性炎症 - 严重烧伤 - 血液稀释 在下列情况中白蛋白会出现增加: - 脱水症状 - 血液浓缩 - 白蛋白注射 Alpha 1 globulins(α1球蛋白区带) 将会在下列情况下出现下降: - 蛋白流失 - 肝功能不全 - 先天性抗胰蛋白酶缺乏症 出现两个条带: - 抗胰蛋白酶的不同基因型 出现增加: - 炎症症状 A1AT 等电聚焦电泳 急性炎症电泳图谱 Alpha 2 globulins(α2球蛋白区带) 下列情况中出现下降: - 肝功能不全 - 血管内溶血 出现两个条带: - 溶血标本 (结合珠蛋白-血红蛋白复合体) - 结合珠蛋白不同基因型 - 出现单克隆免疫球蛋白(带有大量负电荷) *Alpha 2条带在电泳图谱中,是一个很特殊的条带. 因为这一条带中含有五种蛋白: HDL, Haptoglobin, Alpha 2 Macroglobulin, Ceruloplasmin and Gc globulin. 由于结合珠蛋白有不同的基因表现型, 增加了这一条带的复杂程度. 结合珠蛋白非常靠近Alpha 1条带; 出现溶血时结合珠蛋白的迁移率会发生改变. 同时,由于HDL的含