964细胞工程杨淑慎解读.doc

第二章 细胞工程实验室组成及无菌操作技术 植物细胞培养基的组成成分 1.无机化合物 大量元素(major element) ：C、H、O、N、P、K、Ca、Mg、S 微量元素(minor element) ：Fe、B、Zn、Cu、Mn、 Co、Mo 2.有机化合物 （1）维生素：直接参与酶的形成以及蛋白质、脂肪的代谢，常用的有维生素VB1(盐酸硫胺素)、VB6(盐酸吡哆醇)、 VB3（烟酸）、 VB9(叶酸)、肌醇以及维生素C(抗坏血酸)等 （2）氨基酸：甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺等 （3）其他有机附加物：水解酪蛋白（CH）、椰子汁（CM）、麦芽浸出物（ME）、酵母浸出物（YE）等 3.碳源和能源 常用蔗糖，作为碳源和能源，同时也可维持一定的渗透压；也可用葡萄糖、果糖、麦芽糖、半乳糖、甘露糖和乳糖等。 4.植物生长调节物质(Plant growth regulator) （1）生长素类(auxin)：促进细胞生长和分裂，用于诱导愈伤组织的形成和根的分化，常用的有2,4-D、IAA、NAA和IBA等 （2）细胞分裂素类(cytokinin)：促进细胞分裂；诱导愈伤组织或器官的分化，常用6-BA、KT、ZT等 （3）赤霉素类:常用赤霉酸(GA3)，可促进幼苗茎的伸长生长和胚状体发育成小植株 （4）脱落酸 （5）乙烯 5.固化剂 常用琼脂，一般用量为0.6～1.0％，有时可配成不加固化剂的液体培养基，进行液体浅层培养，液体培养有如下优点：低成本、生长快、移栽成活率高等。 6.其他成分： 活性炭、硝酸银、抗生素等 动物细胞培养基的组成、常用培养基类型、常用溶液 培养基的成分 1.糖类：作为碳源和能源，主要是葡萄糖，含量一般为1g/L（低糖）或4.5g/L（高糖） 2.氨基酸：12种必需氨基酸 3.维生素：包括叶酸、维生素B、烟酰胺和吡哆醇等 4.无机盐类：大量元素包括Na+、K+、Ca2+、Mg2+、PO43-等，微量元素包括Cu2+ ，Zn2+ 和Mn2+等。 5.生长类因子及激素：血清中含有生长因子、促进细胞贴壁的因子、矿物质、激素、脂类等，另外血清可以抑制胰酶的活性。 常用培养基 1.天然培养基：直接取自动物组织提取液或体液作为培养基，如血清、淋巴液、血浆凝块、水解乳蛋白、胶原等，成分复杂，来源有限 2.合成培养基：常用的有BME、MEM、DMEM、IMEM、199、F10、F12、PRMI-1640等，人工设计、化学成分明确，但缺乏各种激素和生长因子，往往需加入5%-10%小牛血清 3.无血清培养基：组成成分已知，一般由基础培养基、激素和生长因子、基质三部分组成 其他常用溶液 平衡盐溶液(BSS)：主要由无机盐和葡萄糖配制而成，用于维持细胞的渗透压、维持pH值和细胞正常的代谢等；最常用的有PBS、Earl液和Hank’s液。 PH调节液：NaHCO3溶液和HEPES缓冲液 消化液：常用的有胰蛋白酶溶液、EDTA溶液、胶原酶溶液 抗生素溶液：双抗溶液（链霉素、青霉素） 第三章 植物组织与细胞培养的基本原理 植物组织培养 植物细胞全能性：（totipotent）是指每个植物细胞都具有该物种的全部遗传信息，在适宜条件下具有发育成完整植株的能力。 脱分化(dedifferentiation)：在离体培养条件下，一个已分化的细胞回复到原始分生组织细胞状态的过程就叫脱分化（或去分化）。 再分化(redifferentiation)：脱分化状态的细胞在特定条件下，重新恢复细胞的分化能力，最终形成各种组织、器官或胚状体等，这一过程称为再分化。 愈伤组织（callus）：脱分化后的细胞，经过细胞分裂，产生能迅速增殖的无特定结构和功能的细胞团，称为愈伤组织。 继代培养(subculture)：对来自于外植体所增殖的培养物(包括细胞、组织或其切段)通过更换新鲜培养基及不断切割或分离，进行连续多代的培养，就称为继代培养。 外植体：植物组织培养中用来进行离体培养的材料,可以是器官、组织、细胞和原生质体。 器官发生：是指离体培养条件下的组织或细胞团（愈伤组织）分化形成不定根、不定芽等器官的过程。 胚状体：（embryoid）是由组织培养产生的具有胚芽、胚根双极性、类似天然种子胚的结构，具有萌发长成植株的能力。胚状体是由体细胞发育而来，又称体细胞胚(somatic embryo)。 人工种子：通过将植物组织培养中所产生的体细胞胚或珠芽等包埋在“人工胚乳”和“人工种皮”里，制成的具有播种功能、类似天然种子的颗粒就称为人工种子。 植物组织培养的理论基础:细胞的全能性。 离体条件下的脱分化和再分化过程 1.诱导期：表现为细胞质增生，细胞核增大并向中央移动，细胞回复到分生细胞状态，细胞分裂即将开始。 2.分裂期：细