2D谱疑难解析这是网上列举的部分实例，有些是很有参考价值的，有些.doc

2D谱疑难解析这是网上列举的部分实例，有些是很有参考价值的，有些值得商榷，欢迎讨论[很想知道都那些专家得出的建议，以便特邀讨论。这个是标准2D谱 ---以下是参考谱和参考分析— 氨基甲酰化（Carbamylation trains）导致太多蛋白斑点串，不属于常规的磷酸化等修饰可能原因：尿素（urea）不纯建议：用更纯的尿素，避免样品加热，或者用Amberlite IRN-150L去异氰酸盐（isocyanate） 蛋白样品制备步骤错误导致蛋白丢失可能原因：样品制备TCA/丙酮沉淀后用预冷的丙酮洗涤沉淀，导致TCA残留建议：用90%丙酮/10%H2O洗涤,可以彻底洗去TCA不同的样品制备步骤导致完全不同的蛋白斑点图谱 右边的垂直条带包含了所有pIs值pH7的蛋白。可能原因：？？建议：？？？？ 样品含高丰度蛋白导致出现水平条带可能原因：高丰度蛋白聚集后，若采用胶面朝下的胶条槽，易造成水平条带。建议：采用杯上样胶条槽或manifold等胶面朝上的胶条槽。 出现水平条带（窄pH范围胶条）可能原因：聚焦不够，或者盐离子过多造成水平条带的其它原因：Detergent去污剂浓度过低尿素浓度过低DTT浓度过低，或者用量过少上样位置不合适（比如cup loading）蛋白酶活性胶条溶胀时间过短样品中含有不溶的蛋白(centrifuge 1 hr / 40,000 g) 空气中的CO2 试剂不新鲜可能原因：TEMED不新鲜。建议：尽管TEMED用量很少，还是建议每年更换一瓶TEMED。 试剂质量影响蛋白斑点成像可能原因：Tris质量不好 步骤错误导致蛋白丢失可能原因：蛋白转移电压过高（400V，18cm胶）——在开始的45分钟内不要超过2W/gel（Ettan size） 植物样品可能原因：多糖未去除干净，被考马氏亮蓝染色建议：样品用clean-up处理 蛋白斑点出现垂直条带可能原因：平衡过程中DTT不足，导致一些蛋白出现垂直条带。 样品中含盐等离子过高可能原因：样品中含盐等离子杂质过高，导致等电聚焦失败。建议：避免过多盐，需除盐，如在洗细胞时要把PBS在离心后彻底移除，或在最后一步清洗时采用250mM蔗糖/10mM Tris 洗细胞。 pH6－11的胶条Rehydration Loading Cup loading 建议：对于碱性pH范围胶条，用杯上样效果更好 保存第二向凝胶时温度太低可能原因：保存第二向凝胶时温度太低， SDS有沉淀建议：长时间保存（2days - 2weeks）在4－8， 在二向进行前应提前把凝胶取出，室温放置。