万寿菊花超临界萃取物的抗氧化活性..doc

万寿菊花超临界萃取物的抗氧化活性 李大婧1,?2,吴海虹1,?3,宋江峰1,?3,刘春泉1,?3,刘春菊1, 3,李志强1, 3 ????(?1.江苏省农业科学院农产品加工研究所,江苏南京210014;?2.东北林业大学林学院,黑龙江哈尔滨150040;?3.国家农业科技华东(江苏)创新中心农产品加工工程技术研究中心,江苏南京210014)????摘要:采用超临界CO2萃取技术辅以乙醇为夹带剂,制备万寿菊花超临界萃取物(SupercriticalCO2extracts?ofmarigold?flower,?SEMF)。从抗脂质过氧化能力、还原能力及对羟基自由基(·OH)和超氧阴离子自由基(O-2·)的清除能力方面,综合考察SEMF的体外抗氧化活性。结果表明:?SEMF对脂质过氧化有较强的抑制能力,并具有较强的还原能力,其清除·OH和O-2·的EC50分别为0·000?83?mg/ml、0·000?74?mg/ml(以叶黄素计)。SEMF在这些体系中均表现出较强的抗氧化能力,表明SEMF是一种优良的天然抗氧化剂和自由基清除剂。????关键词:万寿菊;超临界萃取;叶黄素;抗氧化活性????中图分类号:S682.?1+101　　　文献标识码:A　　　文章编号:1000-4440(2009)04-0894-06????万寿菊(Tagetes?erectaL.?)为菊科万寿菊属植物,花瓣中叶黄素含量较高,已成为当前工业生产叶黄素的良好原料。叶黄素是含紫罗酮环的二羟基类胡萝卜素,具有较强的抗氧化性能,它能吸收对视网膜有损害作用的蓝光,在老年性黄斑退化病和白内障疾病防治方面具有重要作用。作者曾就万寿菊花中叶黄素的新型提取分离方法及分析方法等做过深入研究[1-3]。另有研究曾报道叶黄素具有清除自由基及抑制脂质过氧化的能力[4-7];廖萍泰等指出叶黄素具有淬灭单线态氧的能力[8]。而体外试验中有关富含叶黄素的万寿菊花超临界萃取物(Super-critical?extract?ofmarigold?flower,?SEMF)抗氧化活性则未见报道,其清除超氧阴离子自由基(O-2·)、羟基自由基(·OH)、过氧化自由基(ROO·)的能力至今未知。????有关抗氧化物质的活性检测方法主要分为2种:一种是测定目标体系中过氧化物的形成,抗氧化剂通过阻断产生过氧化物的自由基链式反应发挥抗氧化作用,体系中过氧化物的量越少,抗氧化剂的活性就越强;另一种是测定自由基的清除率,抗氧化剂通过对形成的自由基供氢或供电子以达到清除自由基的目的。本研究以万寿菊干花颗粒为原料,采用超临界流体技术制备得到SEMF,探讨其在猪油、亚油酸体系中阻断ROO·的能力,清除体外O-2·、·OH的能力及还原能力,旨在为万寿菊花的深加工及新型抗氧化产品开发提供理论依据。????1　材料与方法????1·1　试验材料、仪器与试剂????万寿菊(Tagetes?erectaL.?)干花颗粒,购于云南曲靖博浩生物科技有限公司。主要仪器:HA221-40-11超临界流体萃取装置(南通华安超临界萃取有限公司);?LGJ-12真空冷冻干燥机(北京松源华兴科技发展有限公司);FS-180万能粉碎机(江苏黎明制药机械有限公司);?722S型分光光度计(上海棱光技术有限公司);RE52CS旋转蒸发仪(上海亚荣仪器厂);?101A-2数显电热鼓风干燥箱(上海浦东荣丰科学仪器有限公司);?LD4-2离心机(北京医用离心机厂);国产JD-3型光照度计(上海市嘉定学联仪表厂);超氧阴离子清除试验自制反应箱。试剂:?CO2气体,食品级,?99%?(南京兰叶气体有限公司);抗氧化剂BHT,食品级;猪油,猪板油湿法熬制并经过滤后使用(市售);正己烷、石油醚、无水硫酸钠、甲苯、氢氧化钾、甲醇、氯仿、冰乙酸、碘化钾、硫代硫酸钠、淀粉、丙酮、无水乙醇、盐酸、氢氧化钠、维生素E、磷酸氢二钠、硫酸二氢钠、硫氰酸铵、氯化亚铁、铁氰化钾、三氯乙酸、三氯化铁、邻二氮菲、硫酸亚铁、H2O2、蛋氨酸(MET)、氯化硝基四唑氮蓝(NBT)和维生素B2等,均为分析纯或生化试剂。????1·2　试验方法????1·2·1　SEMF的制备　工艺流程:万寿菊干花颗粒→粉碎→过20目筛→超临界CO2萃取→萃取物浓缩,并用氮气吹干。试验中选取万寿菊花颗粒1?000g,粉碎粒度为20目。超临界CO2萃取条件为:萃取压力30MPa,萃取温度55℃,CO2流量60?L/h,夹带剂用量为原料量的20%,动态运行4?h,从分离釜Ι中得萃取物,静置、过滤浓缩后得SEMF?95?g,采用AOAC法[9]测定叶黄素含量为9%。SEMF经皂化、干燥、结晶制得叶黄素晶体[10],采用AOAC法[9]测定叶黄素含量为95%,作为试验对照品。????1·2·